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bobcanada至尊木蟲 (文壇精英)
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[求助]
HPLC問題求助高手 已有3人參與
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2000年購(gòu)買的Bio-Rad 公司的Biologic DuoFlow Chromatography System，一直用于分析蛋白質(zhì)（凝膠色譜及離子交換色譜）。最近3－4年沒有人使用了，一直閑置�，F(xiàn)在想用于反相HPLC分析，所以新買了C18色譜柱，但還沒有連接上C18色譜柱。準(zhǔn)備先試驗(yàn)一下系統(tǒng)是否還工作。遇到了麻煩。 流動(dòng)相A: 0.1% TFA/水；流動(dòng)相B: 0.1% 乙腈。使用前，2個(gè)流動(dòng)相溶液都分別用超聲波清洗器做15分鐘脫氣處理。 開始試驗(yàn)系統(tǒng)。流動(dòng)相：A 90%， B 10%，走3分鐘；然后A從 90%到0%， B從 10%到100%，走25分鐘。 可以看到，沒有連接色譜柱的情況下，色譜圖出現(xiàn)很多峰，特別是在走梯度的時(shí)候。如果單純走水，沒有這些峰。 水占90%的時(shí)候，峰也很少。好像是每間隔2分鐘，就出1個(gè)峰。是氣泡峰嗎？還是以前管線里面沉積的蛋白殘留物？ 本人沒有操作過HPLC，是新手，身邊沒有人請(qǐng)教�，F(xiàn)請(qǐng)教小木蟲上都專家和高手，怎么解決？萬分感謝！ HPLC-BioLogic DuoFlow.PNG |
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bobcanada(費(fèi)姚永芬代發(fā)): 金幣+5, 謝謝交流，歡迎常來分析版 2014-02-11 08:13:35
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多走幾次吧，對(duì)比圖譜是否一致，如果有雜質(zhì)，圖譜會(huì)隨清洗次數(shù)增加而發(fā)生變化，如果圖譜一致沒變化，說明乙腈可能有問題！這樣可以排除乙腈的問題！然后再換其它牌號(hào)、批次的乙腈做對(duì)比，總之，多走幾個(gè)圖譜再說�。。� |
10樓2014-02-08 08:18:18
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| 不一定是乙腈的問題，你把AB兩相都換成純化水，在走一下，如果還這樣，應(yīng)該是儀器的問題。你的儀器很久沒用，管路、泵、檢測(cè)器都有可能狀態(tài)不好，看你的基線，我的直覺是泵有問題，排除流動(dòng)相原因，有可能是步進(jìn)電機(jī)或控制主板有問題，你接上一根阻尼管或色譜柱觀察一下壓力波動(dòng)情況。 |
11樓2014-02-08 08:50:33
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乙腈是EMD公司的HPLC專用乙腈。 產(chǎn)品訂購(gòu)來源： https://ca.vwr.com/store/catalog ... g_number=CAAX0145-1 產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告：https://ca.vwr.com/stibo/hi_res/10646475.pdf |
3樓2014-02-08 02:42:16
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