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lingbi銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
T載體上的酶切位點(diǎn) 已有3人參與
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正在設(shè)計(jì)目的基因,上下游分別是EcoRI \BamHI ,請(qǐng)問,如果我將PCR產(chǎn)物連在T載體上送測(cè)序,回頭再將目的片段切下來可不可以?看到T載上也有這兩個(gè)位點(diǎn)會(huì)不會(huì)切下來的切多了連在表達(dá)載體上讀碼框移位之類的麻煩?請(qǐng)問大家怎么解決的? T.jpg |
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
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... 問題1. 可以T載體測(cè)序后再酶切連接目的載體 但其實(shí)最后在目的載體上測(cè)序比較合適 問題2. 載體自有酶切位點(diǎn)的,很有可能會(huì)干擾你的酶切位點(diǎn)的酶切,所以請(qǐng)選用pMD19-T (simple)型T載體,此T載體沒有MCS區(qū)域,或使用其他沒有你酶切位點(diǎn)的T載體,如pGEM-T型就沒有EcoRI和BamHI 祝實(shí)驗(yàn)順利 |

鐵桿木蟲 (正式寫手)

金蟲 (正式寫手)
銀蟲 (正式寫手)
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