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lingbi銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
T載體上的酶切位點(diǎn) 已有3人參與
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正在設(shè)計(jì)目的基因，上下游分別是EcoRI \BamHI ,請(qǐng)問，如果我將PCR產(chǎn)物連在T載體上送測(cè)序，回頭再將目的片段切下來可不可以？看到T載上也有這兩個(gè)位點(diǎn)會(huì)不會(huì)切下來的切多了連在表達(dá)載體上讀碼框移位之類的麻煩？請(qǐng)問大家怎么解決的？ T.jpg |
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atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
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lingbi: 金幣+2, ★★★★★最佳答案 2014-02-24 12:15:38
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lingbi: 金幣+2, ★★★★★最佳答案 2014-02-24 12:15:38
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... 問題1. 可以T載體測(cè)序后再酶切連接目的載體 但其實(shí)最后在目的載體上測(cè)序比較合適 問題2. 載體自有酶切位點(diǎn)的，很有可能會(huì)干擾你的酶切位點(diǎn)的酶切，所以請(qǐng)選用pMD19-T (simple)型T載體，此T載體沒有MCS區(qū)域，或使用其他沒有你酶切位點(diǎn)的T載體，如pGEM-T型就沒有EcoRI和BamHI 祝實(shí)驗(yàn)順利  |
2樓2014-02-23 16:38:58
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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3樓2014-02-23 19:15:01
shiyiyaya
金蟲 (正式寫手)
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4樓2014-02-23 20:37:00
lingbi
銀蟲 (正式寫手)
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5樓2014-02-24 12:16:56
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