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ATP對蛋白穩(wěn)定性的影響
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| 在做蛋白與tRNA的binding實驗時,加了ATP導(dǎo)致蛋白沉淀,ATP濃度為10mM,加AMP或AMPPNP代替,情況稍微好一點,但也有部分沉淀。因為沒有加氨基酸,所以應(yīng)該還沒有反應(yīng),是因為靜電作用或是空間位阻的原因引起蛋白構(gòu)型發(fā)生較大變化而沉淀嗎?還請各位了解tRNA氨;^程的幫忙分析下原因呀。。。 |
至尊木蟲 (文壇精英)
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蛋白能與RNA結(jié)合,說明蛋白表面是帶正電的,ATP是酸性的,加了ATP導(dǎo)致酸堿中和,降低了蛋白質(zhì)的溶解度,所以沉淀。 ATP的酸性很強,請問你配制ATP時有沒有用NaOH調(diào)pH值?最好把ATP調(diào)成近似中性的,吸一微升用pH試紙檢測就行。 如果還不行的話,可能要改變一下蛋白所處緩沖液的pH值。 如果還不行的話,考慮增加一下離子強度,總之問題應(yīng)該是出在蛋白溶解度上,往這個方向改進(jìn)實驗應(yīng)該會有幫助。 希望對你有幫助。 |
至尊木蟲 (文壇精英)
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