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[求助]
ATP對(duì)蛋白穩(wěn)定性的影響
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| 在做蛋白與tRNA的binding實(shí)驗(yàn)時(shí)，加了ATP導(dǎo)致蛋白沉淀，ATP濃度為10mM，加AMP或AMPPNP代替，情況稍微好一點(diǎn)，但也有部分沉淀。因?yàn)闆](méi)有加氨基酸，所以應(yīng)該還沒(méi)有反應(yīng)，是因?yàn)殪o電作用或是空間位阻的原因引起蛋白構(gòu)型發(fā)生較大變化而沉淀嗎？還請(qǐng)各位了解tRNA氨酰化過(guò)程的幫忙分析下原因呀。。。 |
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lihe131
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
筆冰河: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-03-06 16:49:08
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蛋白能與RNA結(jié)合，說(shuō)明蛋白表面是帶正電的，ATP是酸性的，加了ATP導(dǎo)致酸堿中和，降低了蛋白質(zhì)的溶解度，所以沉淀。 ATP的酸性很強(qiáng)，請(qǐng)問(wèn)你配制ATP時(shí)有沒(méi)有用NaOH調(diào)pH值��？最好把ATP調(diào)成近似中性的，吸一微升用pH試紙檢測(cè)就行。 如果還不行的話，可能要改變一下蛋白所處緩沖液的pH值。 如果還不行的話，考慮增加一下離子強(qiáng)度，總之問(wèn)題應(yīng)該是出在蛋白溶解度上，往這個(gè)方向改進(jìn)實(shí)驗(yàn)應(yīng)該會(huì)有幫助。 希望對(duì)你有幫助。  |
2樓2014-03-05 18:25:40
3樓2014-03-06 18:30:35
4樓2014-03-06 19:57:13
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7樓2014-03-07 09:42:40
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8樓2014-03-07 10:11:56
9樓2014-03-07 10:29:51
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舉個(gè)例子啊： 假如我在pH7.0的緩沖液中分別準(zhǔn)備蛋白和核酸。蛋白是堿性的，等電點(diǎn)9.0；核酸是酸性的，等電點(diǎn)是5.0。 此時(shí)他們都能溶解：等電點(diǎn)9.0的蛋白在7.0的緩沖液中帶正電；等電點(diǎn)5.0的核酸在7.0的緩沖液中帶負(fù)電。以為表面都帶電，所以都能溶解。 然而，我把它們混合后，形成了復(fù)合物，帶正電的蛋白和帶負(fù)電的核酸彼此中和典型，導(dǎo)致復(fù)合物的等電點(diǎn)變?yōu)?.0，而緩沖液也是7.0，所以復(fù)合物表面就不帶電了，就不溶解了。 這只是個(gè)例子啊，數(shù)都是編的，希望對(duì)你有幫助。 |
10樓2014-03-07 10:41:36
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