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[求助]
ATP對蛋白穩(wěn)定性的影響
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| 在做蛋白與tRNA的binding實驗時，加了ATP導致蛋白沉淀，ATP濃度為10mM，加AMP或AMPPNP代替，情況稍微好一點，但也有部分沉淀。因為沒有加氨基酸，所以應該還沒有反應，是因為靜電作用或是空間位阻的原因引起蛋白構(gòu)型發(fā)生較大變化而沉淀嗎？還請各位了解tRNA氨�；^程的幫忙分析下原因呀。。。 |
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4樓2014-03-06 19:57:13
lihe131
至尊木蟲 (文壇精英)
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
筆冰河: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-03-06 16:49:08
筆冰河: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2014-03-06 19:53:37
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蛋白能與RNA結(jié)合，說明蛋白表面是帶正電的，ATP是酸性的，加了ATP導致酸堿中和，降低了蛋白質(zhì)的溶解度，所以沉淀。 ATP的酸性很強，請問你配制ATP時有沒有用NaOH調(diào)pH值�。孔詈冒袮TP調(diào)成近似中性的，吸一微升用pH試紙檢測就行。 如果還不行的話，可能要改變一下蛋白所處緩沖液的pH值。 如果還不行的話，考慮增加一下離子強度，總之問題應該是出在蛋白溶解度上，往這個方向改進實驗應該會有幫助。 希望對你有幫助。  |
2樓2014-03-05 18:25:40
3樓2014-03-06 18:30:35
5樓2014-03-06 20:02:21
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