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[求助]
ATP對(duì)蛋白穩(wěn)定性的影響
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| 在做蛋白與tRNA的binding實(shí)驗(yàn)時(shí),加了ATP導(dǎo)致蛋白沉淀,ATP濃度為10mM,加AMP或AMPPNP代替,情況稍微好一點(diǎn),但也有部分沉淀。因?yàn)闆](méi)有加氨基酸,所以應(yīng)該還沒(méi)有反應(yīng),是因?yàn)殪o電作用或是空間位阻的原因引起蛋白構(gòu)型發(fā)生較大變化而沉淀嗎?還請(qǐng)各位了解tRNA氨;^(guò)程的幫忙分析下原因呀。。。 |
至尊木蟲(chóng) (文壇精英)
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蛋白能與RNA結(jié)合,說(shuō)明蛋白表面是帶正電的,ATP是酸性的,加了ATP導(dǎo)致酸堿中和,降低了蛋白質(zhì)的溶解度,所以沉淀。 ATP的酸性很強(qiáng),請(qǐng)問(wèn)你配制ATP時(shí)有沒(méi)有用NaOH調(diào)pH值啊?最好把ATP調(diào)成近似中性的,吸一微升用pH試紙檢測(cè)就行。 如果還不行的話,可能要改變一下蛋白所處緩沖液的pH值。 如果還不行的話,考慮增加一下離子強(qiáng)度,總之問(wèn)題應(yīng)該是出在蛋白溶解度上,往這個(gè)方向改進(jìn)實(shí)驗(yàn)應(yīng)該會(huì)有幫助。 希望對(duì)你有幫助。 |
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