 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2406 | 回復(fù): 10 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
pet32a雙酶切之后，電泳條帶找不到 已有3人參與
|
|||
|
小弟本科生一枚，最近在構(gòu)建一種菌，可是經(jīng)過了兩個月的嘗試，還是沒有成功，愁死了，這個是學(xué)校的一個大學(xué)生訓(xùn)練項目，搞了這么久還沒構(gòu)建出菌種，我在九月之前還要做出目的蛋白的表達(dá)，對表達(dá)蛋白的性質(zhì)做出研究，才能結(jié)題，現(xiàn)在是愁死了，求告各位大俠給予意見。 首先，我用的是X-hol和BamHI這兩個酶，目的基因在2700左右，目的基因在經(jīng)過PCR之后，做37度雙酶切6h能跑出目的條帶。這個是確定的。但是在雙酶切32a質(zhì)粒之后，確實無論如何也跑不出條帶。后來又做了單酶切切pet-32a質(zhì)粒，但是3h之后，依舊是沒有任何條帶出現(xiàn)。（聲明：32a未經(jīng)酶切的質(zhì)粒是跑得出來的。）今日又做了分小時單酶切，做法是每半小時去一次37度酶切樣品，迅速放入65度烘箱中使其中的酶失活，共切了兩個小時，卻還是沒有跑出任何條帶，這不應(yīng)該啊，剛加入酶就取樣的也沒跑出來，這太不合理了吧！（取樣：2微升跑膠。）今天的除了沒有酶切過的質(zhì)粒跑出來了非常明顯的條帶，其余的都沒跑出來，是跑膠打樣太少了么？ 雙酶切體系：50微升 10Xbuffer tango 10微升 BamHi 2微升 X-hol 2微升 pet-32a質(zhì)粒 36微升（有時質(zhì)粒濃度高的話也會用25微升質(zhì)粒加11微升ddH2O） 37度水浴6h 單酶切體系：20微升 buffer tango 4微升 BamHI 0.5微升 32a質(zhì)粒 10微升 ddH2O 5.5微升 單酶切體系：20微升 buffer tango 4微升 X-hol 0.5微升 32a質(zhì)粒 10微升 ddH2O 5.5微升 另外，跑膠電壓是100V 時間是40分鐘 這個應(yīng)該不會有什么問題吧？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有239人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 求助，酶切之后，非但是沒有產(chǎn)物，而且連原本的質(zhì)粒也沒跑出來
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 雙酶切后如何才能讓載體自連？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 請教關(guān)于載體中酶切位點(diǎn)和插入片段的問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- EcoR1酶切體系
已經(jīng)有11人回復(fù)
- PET-32A重組質(zhì)粒構(gòu)建
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 載體酶切位點(diǎn)與目的片段重復(fù)
已經(jīng)有13人回復(fù)
- PET-28a載體怎么解讀
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 片段總是連不到T載體上
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 空質(zhì)粒雙酶切后出現(xiàn)消失的情況
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 未插入目的片段的空載體質(zhì)粒怎么擴(kuò)增出目的條帶，求解，求真相！�。�！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 酶切產(chǎn)物能直接做連接反應(yīng)嗎
已經(jīng)有5人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物雙酶切遇到問題，求救�。。�
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 關(guān)于pET32a的HIS標(biāo)簽
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 雙酶切后切膠回收
已經(jīng)有34人回復(fù)
- 原核表達(dá)重組質(zhì)粒提取
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 提質(zhì)粒遇到問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 表達(dá)載體的構(gòu)建
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】純化酶切后的膜蛋白做Western blot沒條帶，why？
已經(jīng)有9人回復(fù)
5樓2014-03-07 21:11:27
youlinglyw
榮譽(yù)版主 (著名寫手)
一匡天下
-
專家經(jīng)驗: +37 - MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 136 (高中生)
- 貴賓: 0.077
- 金幣: 8052.9
- 散金: 8858
- 紅花: 208
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 1511
- 在線: 263.8小時
- 蟲號: 787036
- 注冊: 2009-06-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 認(rèn)知科學(xué)
- 管轄: 生物科學(xué)
2樓2014-03-06 22:46:22
3樓2014-03-06 22:53:01
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 363 (碩士)
- 金幣: 7753.3
- 散金: 15
- 紅花: 9
- 帖子: 751
- 在線: 189.4小時
- 蟲號: 819723
- 注冊: 2009-07-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
4樓2014-03-07 08:14:46
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +5 | z1z2z3879 2026-03-18 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 294求調(diào)劑材料與化工專碩 +5 | 陌の森林 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)，080502，354分求調(diào)劑 +4 | 守候夕陽CF 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | 小材化本科 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +6 | knight344 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項核心論文五項專利，省、國級證書40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程專碩求調(diào)劑 +6 | 慕寒mio 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料專碩306英一數(shù)二 +10 | z1z2z3879 2026-03-16 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 26考研求調(diào)劑 +6 | 丶宏Sir 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 有沒有道鐵/土木的想調(diào)劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[論文投稿] 有沒有大佬發(fā)小論文能帶我個二作 +3 | 增銳漏人 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +6 | 拾光任染 2026-03-15 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 中科大材料專碩319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | 5201314Lsy！ 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑一志愿 985 總分 295 +8 | dream…… 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] ［0860］321分求調(diào)劑，ab區(qū)皆可 +4 | 寶貴熱 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 芬達(dá)46 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿211化學(xué)學(xué)碩310分求調(diào)劑 +8 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +3 | 小匕仔汁 2026-03-12 | 3/150 |
|