 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2408 | 回復(fù): 10 | |||
[求助]
pet32a雙酶切之后，電泳條帶找不到 已有3人參與
|
|||
|
小弟本科生一枚，最近在構(gòu)建一種菌，可是經(jīng)過(guò)了兩個(gè)月的嘗試，還是沒(méi)有成功，愁死了，這個(gè)是學(xué)校的一個(gè)大學(xué)生訓(xùn)練項(xiàng)目，搞了這么久還沒(méi)構(gòu)建出菌種，我在九月之前還要做出目的蛋白的表達(dá)，對(duì)表達(dá)蛋白的性質(zhì)做出研究，才能結(jié)題，現(xiàn)在是愁死了，求告各位大俠給予意見(jiàn)。 首先，我用的是X-hol和BamHI這兩個(gè)酶，目的基因在2700左右，目的基因在經(jīng)過(guò)PCR之后，做37度雙酶切6h能跑出目的條帶。這個(gè)是確定的。但是在雙酶切32a質(zhì)粒之后，確實(shí)無(wú)論如何也跑不出條帶。后來(lái)又做了單酶切切pet-32a質(zhì)粒，但是3h之后，依舊是沒(méi)有任何條帶出現(xiàn)。（聲明：32a未經(jīng)酶切的質(zhì)粒是跑得出來(lái)的。）今日又做了分小時(shí)單酶切，做法是每半小時(shí)去一次37度酶切樣品，迅速放入65度烘箱中使其中的酶失活，共切了兩個(gè)小時(shí)，卻還是沒(méi)有跑出任何條帶，這不應(yīng)該啊，剛加入酶就取樣的也沒(méi)跑出來(lái)，這太不合理了吧！（取樣：2微升跑膠。）今天的除了沒(méi)有酶切過(guò)的質(zhì)粒跑出來(lái)了非常明顯的條帶，其余的都沒(méi)跑出來(lái)，是跑膠打樣太少了么？ 雙酶切體系：50微升 10Xbuffer tango 10微升 BamHi 2微升 X-hol 2微升 pet-32a質(zhì)粒 36微升（有時(shí)質(zhì)粒濃度高的話也會(huì)用25微升質(zhì)粒加11微升ddH2O） 37度水浴6h 單酶切體系：20微升 buffer tango 4微升 BamHI 0.5微升 32a質(zhì)粒 10微升 ddH2O 5.5微升 單酶切體系：20微升 buffer tango 4微升 X-hol 0.5微升 32a質(zhì)粒 10微升 ddH2O 5.5微升 另外，跑膠電壓是100V 時(shí)間是40分鐘 這個(gè)應(yīng)該不會(huì)有什么問(wèn)題吧？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有298人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 求助，酶切之后，非但是沒(méi)有產(chǎn)物，而且連原本的質(zhì)粒也沒(méi)跑出來(lái)
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 雙酶切后如何才能讓載體自連？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 請(qǐng)教關(guān)于載體中酶切位點(diǎn)和插入片段的問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- EcoR1酶切體系
已經(jīng)有11人回復(fù)
- PET-32A重組質(zhì)粒構(gòu)建
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 載體酶切位點(diǎn)與目的片段重復(fù)
已經(jīng)有13人回復(fù)
- PET-28a載體怎么解讀
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 片段總是連不到T載體上
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 空質(zhì)粒雙酶切后出現(xiàn)消失的情況
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 未插入目的片段的空載體質(zhì)粒怎么擴(kuò)增出目的條帶，求解，求真相�。。�！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 酶切產(chǎn)物能直接做連接反應(yīng)嗎
已經(jīng)有5人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物雙酶切遇到問(wèn)題，求救！�。�
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 關(guān)于pET32a的HIS標(biāo)簽
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 雙酶切后切膠回收
已經(jīng)有34人回復(fù)
- 原核表達(dá)重組質(zhì)粒提取
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 提質(zhì)粒遇到問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 表達(dá)載體的構(gòu)建
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】純化酶切后的膜蛋白做Western blot沒(méi)條帶，why？
已經(jīng)有9人回復(fù)
yixinyuan
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 12 (小學(xué)生)
- 金幣: 6174.1
- 散金: 7
- 紅花: 3
- 帖子: 558
- 在線: 162.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1151599
- 注冊(cè): 2010-11-20
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
6樓2014-03-07 22:40:56
蒙古狐貍
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 1273.1
- 帖子: 177
- 在線: 28.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 2778620
- 注冊(cè): 2013-11-05
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
8樓2014-03-08 09:17:49
youlinglyw
榮譽(yù)版主 (著名寫手)
一匡天下
-
專家經(jīng)驗(yàn): +37 - MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 136 (高中生)
- 貴賓: 0.077
- 金幣: 8052.9
- 散金: 8858
- 紅花: 208
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 1511
- 在線: 263.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 787036
- 注冊(cè): 2009-06-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 認(rèn)知科學(xué)
- 管轄: 生物科學(xué)
2樓2014-03-06 22:46:22
3樓2014-03-06 22:53:01
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 363 (碩士)
- 金幣: 7753.3
- 散金: 15
- 紅花: 9
- 帖子: 751
- 在線: 189.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 819723
- 注冊(cè): 2009-07-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
4樓2014-03-07 08:14:46
5樓2014-03-07 21:11:27
7樓2014-03-07 22:43:18
9樓2014-03-08 22:20:59
10樓2014-03-08 22:22:13
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 無(wú)敵小莫 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-18 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +6 | knight344 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +5 | 陽(yáng)陽(yáng)哇塞 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程321分求調(diào)劑 +15 | 大米飯！ 2026-03-15 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +8 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +4 | 材化逐夢(mèng)人 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 331求調(diào)劑（0703有機(jī)化學(xué) +7 | ZY-05 2026-03-13 | 8/400 |
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 總分331 +3 | ZY-05 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)336分求調(diào)劑 +6 | zbzihdhd 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +9 | yy要上岸呀 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 考研求調(diào)劑 +3 | 橘頌. 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | Yy7400 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中師范071000，325求調(diào)劑 +6 | RuitingC 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703 物理化學(xué)調(diào)劑 +3 | 我可以上岸的對(duì)?/a> 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 土木第一志愿276求調(diào)劑，科研和技能十分豐富，求新興方向的導(dǎo)師收留 +3 | 土木小天才 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑（食品/專碩） +3 | xc321 2026-03-12 | 6/300 |
|