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linglingerl金蟲 (初入文壇)
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[求助]
求分析瓊脂糖凝膠電泳圖 已有4人參與
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求助各位大俠，我剛提取一次質(zhì)粒，跑出來兩條帶，但是最下沿有不甚清晰地一條帶，請問是為什么？如下圖所示： 另外一個比較奇怪的的是，我把質(zhì)粒用一系列濃度的DNase Ⅰ酶切之后跑電泳，上面兩條帶都沒了，只剩下下面的模糊帶，但是為什么會有兩道黑帶呢（如圖2），那又是什么？PS：我用的是6× loading buffer雙染料 |
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liuderong
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2014-03-10 08:28:39
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2014-03-10 08:28:39
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上面那幅圖是質(zhì)粒條帶，質(zhì)粒分超螺旋、線形和開環(huán)三種形態(tài)，電泳顯示大小不一樣，跑出兩三條帶很正常的。下面是沒有完全降解的RNA。 下面那幅圖的亮帶應(yīng)該是降解的DNA（或者混有RNA），兩條黑帶是溴酚藍顯色的結(jié)果，電泳時溴酚藍加多了就是這種樣子。第一個泳道黑帶部分還隱約可見有亮帶，那個應(yīng)該就是質(zhì)粒，其他泳道相同位置應(yīng)該也有帶的，只是量很少，還被溴酚藍遮住了，所以看不到。 |
2樓2014-03-09 20:26:00
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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3樓2014-03-09 21:16:12
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
linglingerl(gyesang代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流！ 2014-03-31 16:08:13
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
linglingerl(gyesang代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流！ 2014-03-31 16:08:13
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質(zhì)粒有三種構(gòu)型。第一種是共價閉合環(huán)狀DNA(covalently close circular DNA，ccc DNA)，它的兩條鏈都保持完整的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，通常呈超螺旋構(gòu)型。第二種是開環(huán)DNA(open circularDNA，oc DNA)，它的雙鏈中的一條保持完整的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，另一條單鏈上有一到幾個切口。第三種是線狀DNA，這種質(zhì)粒的雙鏈斷裂呈線狀。這三種構(gòu)型的同一種質(zhì)粒在瓊脂糖凝膠中電泳時，出現(xiàn)不同的遷移速率，走得最快的是超螺旋構(gòu)型，其次是線性構(gòu)型，最慢的是開環(huán)構(gòu)型。 一般提質(zhì)粒跑膠，都會出現(xiàn)3條帶，質(zhì)粒圖上2條帶很正常。 |
4樓2014-03-10 10:01:30
5樓2014-03-10 11:55:04
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