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shanyaodan銅蟲 (初入文壇)
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[交流]
探討酵母轉(zhuǎn)化子PCR驗(yàn)證方法
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| 本人目前在做酵母轉(zhuǎn)化（質(zhì)粒為游離型的），發(fā)現(xiàn)涂布平板后長出來的轉(zhuǎn)化子重新挑單菌落劃線培養(yǎng)。等培養(yǎng)一天左右長出來的菌體直接進(jìn)行PCR驗(yàn)證，能夠擴(kuò)增出目的條帶，但繼續(xù)培養(yǎng)2天以上，再直接用菌體PCR驗(yàn)證，很難擴(kuò)增出目的條帶。請(qǐng)各位朋友探討一下，是不是因?yàn)槎虝r(shí)間內(nèi)長出來的酵母比較新鮮，細(xì)胞壁較薄，也就是說還沒有長老，在PCR時(shí)容易破壁釋放出質(zhì)粒；而隨著培養(yǎng)時(shí)間加長，細(xì)胞壁變厚導(dǎo)致PC時(shí)擴(kuò)增不出目的條帶？ |
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