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厚德求是木蟲 (著名寫手)
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[求助]
求助!蛋白質(zhì)同源建模,模板不是同工酶,而且相似性低于30%,下一步怎么辦? 已有4人參與
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求助! 現(xiàn)在課題的主要目的是通過理性設(shè)計(jì)來提高酶蛋白的熱穩(wěn)定性,主要的方法是定點(diǎn)突變酶非保守序列上的氨基酸來增加氫鍵,鹽橋(或者二硫鍵)等。 因?yàn)槲业哪0宓鞍资菦]有已知三維結(jié)構(gòu)的,所以需要用同源建模的方法來模擬出我的蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu),預(yù)測(cè)保守序列(活性中心)并避開它們?cè)谄渌胤阶鐾蛔儯倮糜?jì)算機(jī)模擬突變的結(jié)果,選擇能夠突變的氨基酸,再進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證。 我目前用來建模的軟件是DS里面的同源建模板塊,有文獻(xiàn)報(bào)道過對(duì)我這個(gè)酶進(jìn)行同源建模,用的是Swiss......我覺得這些人報(bào)道的不見得可信,因此我想自己建?纯础 現(xiàn)在的問題是,通過DS模板搜索版塊得到的模板(30%相似性,但此模板和文獻(xiàn)報(bào)道中用過的一樣)和我的酶不是同工酶!用這個(gè)模板做的模型結(jié)果里面的蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)改變了,少了17個(gè)氨基酸,而且氨基酸排列順序也變了!這樣就沒法做結(jié)構(gòu)評(píng)價(jià)了!更不要說模擬突變其他位點(diǎn)了,而且模擬出來的活性中心也是很奇怪的梭型而不是圓形,所以我猜用現(xiàn)在這樣的方法是沒法做出來了。 所以,我想要保證蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)不變,要用什么方法繼續(xù)建模?求助 |
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現(xiàn)在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè),除了同源建模(同源性>30%),還包括穿線法(Threading)(同源性%20-30%)和從頭預(yù)測(cè)(ab initio)(<150個(gè)aa).序列相似度30-50%,結(jié)構(gòu)準(zhǔn)確度>80%。預(yù)測(cè)錯(cuò)誤主要集中在環(huán)狀區(qū)域。 序列相似度20-30%,結(jié)構(gòu)準(zhǔn)確度55%左右。網(wǎng)站 http://www.expasy.org/tools,自己看看吧。當(dāng)然還有NAMD法,根據(jù)能量最小而完全計(jì)算機(jī)建模。 |
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看了一下你的描述 建議你還是使用swiss model進(jìn)行同源建模 建模后蛋白質(zhì)一級(jí)序列缺失是比較正常的,只要同模板無法align的區(qū)域,又位于蛋白質(zhì)末端的話,都有可能無法出現(xiàn)在模板區(qū)域 至于氨基酸排列出問題,倒是沒有見過,如果你的DS設(shè)置正確的話,你還是換Swiss model來建模吧,用swiss model是不會(huì)導(dǎo)致氨基酸排列出問題的 此外,根據(jù)你說的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路,你其實(shí)不一定非要進(jìn)行同源建模。建模本來就是預(yù)測(cè),你還要突變了之后根據(jù)建模的結(jié)果再進(jìn)行預(yù)測(cè),這樣實(shí)際上意義已經(jīng)不大了。 單純選擇非保守殘基的話,可以通過序列比對(duì)。你的蛋白是酶蛋白,還可以通過文獻(xiàn)確定其反應(yīng)機(jī)理(發(fā)揮作用的幾個(gè)關(guān)鍵氨基酸類型,比如酸性、堿性啦),避開保守位點(diǎn)的這些殘基。 而且,也可以通過在N端添加特定序列提高酶蛋白的耐熱。 最后,如果你這個(gè)酶蛋白有耐熱的同工酶的話,做個(gè)序列比對(duì)是最有意義的。 |
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木蟲 (著名寫手)
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金蟲 (小有名氣)

木蟲 (著名寫手)
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