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可以往一個細胞內(nèi)轉(zhuǎn)染兩次嗎 已有1人參與
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| 不知道可 不可以先轉(zhuǎn)進一個基因讓細胞過表達，然而再轉(zhuǎn)siRNA干擾另一個蛋白，可不可以，如果可以，是同時轉(zhuǎn)進去還是第一個質(zhì)粒轉(zhuǎn)進去后多少個小時再轉(zhuǎn)干擾RNA? |
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2樓2014-03-31 11:58:30
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各種糾結(jié)。。。 轉(zhuǎn)質(zhì)粒一般默認48h，轉(zhuǎn)siRNA一般默認72h 這里考慮的更多的并不是質(zhì)粒DNA和siRNA的穩(wěn)定性，這兩個玩意穩(wěn)定著呢，一周沒問題。 考慮的是最大效率化，lippo轉(zhuǎn)質(zhì)粒，細胞密度要求90%，轉(zhuǎn)siRNA，細胞密度低一點，所以這么長時間是一盤細胞的生長極限。你再養(yǎng)，細胞死了。 你要兩次轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染肯定有細胞毒性，耐受性不好的細胞可能轉(zhuǎn)一次就活得不咋地了，這個是你需要提前優(yōu)化的。 這只是默認，尤其是siRNA。 經(jīng)�？匆娪袌蟮溃凑漳J的72h檢測siRNA效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)定了一堆siRNA，效果都不好，最后發(fā)現(xiàn)原來是48h或者24h效果最好，原因不明。 所以如果你的這條siRNA沒有做過預實驗，先不要搞這么復雜的 轉(zhuǎn)幾個小dish，收一個時間梯度，看看什么時候效果最好。 把這些預實驗條件先摸好了，再來轉(zhuǎn)兩次。 |
4樓2014-04-03 09:25:13
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