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nanshi304新蟲 (初入文壇)
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[求助]
可以往一個細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染兩次嗎 已有1人參與
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| 不知道可 不可以先轉(zhuǎn)進(jìn)一個基因讓細(xì)胞過表達(dá)，然而再轉(zhuǎn)siRNA干擾另一個蛋白，可不可以，如果可以，是同時轉(zhuǎn)進(jìn)去還是第一個質(zhì)粒轉(zhuǎn)進(jìn)去后多少個小時再轉(zhuǎn)干擾RNA? |
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9樓2015-04-14 10:28:04
biostar2009
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
nanshi304(myprayer代發(fā)): 金幣+2, 贈人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-31 12:44:42
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這個可以的 如果是用Lipofectamine 2000，可以先轉(zhuǎn)siRNA，等24h后再轉(zhuǎn)表達(dá)蛋白的質(zhì)粒 一般siRNA可以72h，蛋白48h足夠了，這樣時間比較好 而且siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞要求密度不太高，這樣長得第二天正好轉(zhuǎn)表達(dá)蛋白質(zhì)質(zhì)粒 |
2樓2014-03-31 11:58:30
nanshi304
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3樓2014-04-02 22:22:49
biostar2009
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-04-03 19:23:48
nanshi304: 金幣+3, ★★★很有幫助 2014-04-04 21:04:58
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nanshi304: 金幣+3, ★★★很有幫助 2014-04-04 21:04:58
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各種糾結(jié)。。。 轉(zhuǎn)質(zhì)粒一般默認(rèn)48h，轉(zhuǎn)siRNA一般默認(rèn)72h 這里考慮的更多的并不是質(zhì)粒DNA和siRNA的穩(wěn)定性，這兩個玩意穩(wěn)定著呢，一周沒問題。 考慮的是最大效率化，lippo轉(zhuǎn)質(zhì)粒，細(xì)胞密度要求90%，轉(zhuǎn)siRNA，細(xì)胞密度低一點，所以這么長時間是一盤細(xì)胞的生長極限。你再養(yǎng)，細(xì)胞死了。 你要兩次轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染肯定有細(xì)胞毒性，耐受性不好的細(xì)胞可能轉(zhuǎn)一次就活得不咋地了，這個是你需要提前優(yōu)化的。 這只是默認(rèn)，尤其是siRNA。 經(jīng)�？匆娪袌蟮溃凑漳J(rèn)的72h檢測siRNA效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)定了一堆siRNA，效果都不好，最后發(fā)現(xiàn)原來是48h或者24h效果最好，原因不明。 所以如果你的這條siRNA沒有做過預(yù)實驗，先不要搞這么復(fù)雜的 轉(zhuǎn)幾個小dish，收一個時間梯度，看看什么時候效果最好。 把這些預(yù)實驗條件先摸好了，再來轉(zhuǎn)兩次。 |
4樓2014-04-03 09:25:13
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