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仙境之橋2009金蟲 (初入文壇)
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[求助]
重疊延伸PCR 已有3人參與
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| 本人剛開始做重疊延伸PCR,現(xiàn)在在用重疊延伸PCR做點突變,之后要做表達(dá)用,兩端有酶切位點,F(xiàn)在有一些問題,想請各位解答。我擴兩條目的條帶的時候,嘗試了多個退火溫度,但是條帶都不單一,并且目的條帶的量很少,請問如何才能使目的條帶的單一且量增加啊?另外,進(jìn)行融合的時候,我見貼子上說退火溫度高一點,延伸時間長一點,進(jìn)行5個循環(huán),我想請教第一輪反應(yīng)如何設(shè)置。渴前凑5姆磻(yīng)95℃ 5min,95℃ 30s,55℃ 30s,72℃ 1min,進(jìn)行5個循環(huán),再72℃ 10min,4℃ 10min,是這樣么?退火溫度怎么設(shè)置。康诙喎磻(yīng),也是按上邊的方法么?請各位前輩給于解答,非常感謝。 |
銅蟲 (初入文壇)
鐵桿木蟲 (正式寫手)

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