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仙境之橋2009金蟲 (初入文壇)
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[求助]
重疊延伸PCR 已有3人參與
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| 本人剛開始做重疊延伸PCR，現(xiàn)在在用重疊延伸PCR做點突變，之后要做表達用，兩端有酶切位點�，F(xiàn)在有一些問題，想請各位解答。我擴兩條目的條帶的時候，嘗試了多個退火溫度，但是條帶都不單一，并且目的條帶的量很少，請問如何才能使目的條帶的單一且量增加啊？另外，進行融合的時候，我見貼子上說退火溫度高一點，延伸時間長一點，進行5個循環(huán)，我想請教第一輪反應(yīng)如何設(shè)置��？是按正常的反應(yīng)95℃ 5min，95℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 1min，進行5個循環(huán)，再72℃ 10min，4℃ 10min，是這樣么？退火溫度怎么設(shè)置��？第二輪反應(yīng)，也是按上邊的方法么？請各位前輩給于解答，非常感謝。 |
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4樓2014-04-04 16:13:20
mars199026
銅蟲 (初入文壇)
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2樓2014-04-01 09:23:23
lvbobo823
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3樓2014-04-01 11:32:26
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