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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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意蕭02

木蟲 (正式寫手)

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[求助] 急，求各位幫忙分析原因，關(guān)于pcr與跑膠的問(wèn)題已有2人參與

各位蟲友大家好，本人剛接觸做水稻QTL的課題，在pcr與連續(xù)聚丙烯凝膠電泳時(shí)出現(xiàn)問(wèn)題了，請(qǐng)給位幫忙分析原因，在此先謝謝了。

我做的目標(biāo)DNA片段大約50bP左右。pcr體系分別為：
ddH2O                   3.2ul
混合酶（買的）    5ul（每分鐘擴(kuò)增1-2kB，預(yù)混loading buffer裝)
引物                      1ul
模板DNA                0.8ul

PCR參數(shù)：
94度       5min
94度       45s
55度       45s
72度       90s
72度       7min
4度          無(wú)窮

聚丙烯酰胺凝膠電泳配置(每板）：
H20                               30ml
母液（40%丙烯酰胺） 6ml
50xTAE緩沖液                300ul
10% APS                      300ul
TEMED                         25ul
上樣量1.6ul  電壓120v  90min
結(jié)果有的可以跑出條帶，有的模糊不清，幾乎沒(méi)有，還有拖帶現(xiàn)象，具體如下圖所示，三圖來(lái)自不同的三種引物。
DNA樣，混合酶等問(wèn)題可以排除，請(qǐng)問(wèn)還可能問(wèn)題出在哪？是引物的問(wèn)題嗎？

不能跑出.jpg

不能跑出條帶.jpg

可以跑出條帶.jpg

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1樓 2014-04-02 18:39:42

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-04-02 21:16:09

你點(diǎn)marker了嗎，沒(méi)有的話也不好說(shuō)是膠的問(wèn)題還是PCR的問(wèn)題，如果marker是清晰的，那膠沒(méi)有問(wèn)題。

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2樓2014-04-02 20:07:12

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2014-04-02 20:07:12
你點(diǎn)marker了嗎，沒(méi)有的話也不好說(shuō)是膠的問(wèn)題還是PCR的問(wèn)題，如果marker是清晰的，那膠沒(méi)有問(wèn)題。

點(diǎn)了，marker沒(méi)問(wèn)題哦

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3樓2014-04-02 20:13:37

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引用回帖:

3樓: Originally posted by 意蕭02 at 2014-04-02 20:13:37
點(diǎn)了，marker沒(méi)問(wèn)題哦...

那可能是引物不特異，你提高退火溫度試試，或者做個(gè)梯度。再不行就得優(yōu)化引物

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4樓2014-04-02 20:19:48

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【答案】應(yīng)助回帖

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意蕭02: 金幣+2, ★★★很有幫助 2014-04-03 16:03:05
意蕭02(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-04-03 19:22:23

感覺(jué)應(yīng)該是引物特異性不強(qiáng)，同意樓上的，做個(gè)梯度PCR驗(yàn)證一下吧

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You just need a little faith!

5樓2014-04-03 10:30:53

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至尊木蟲 (著名寫手)

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

lz能給張大圖不，看的我眼都花了，還有Mark在嗎�？梢詷�(biāo)出來(lái)不？

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有些東西因?yàn)榈貌坏蕉兊妹篮�，有些東西因?yàn)閾碛卸兊脧涀阏滟F！

6樓2014-04-04 14:01:16

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