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[求助]
急，求各位幫忙分析原因，關(guān)于pcr與跑膠的問題 已有2人參與
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各位蟲友大家好，本人剛接觸做水稻QTL的課題，在pcr與連續(xù)聚丙烯凝膠電泳時出現(xiàn)問題了，請給位幫忙分析原因，在此先謝謝了。 我做的目標(biāo)DNA片段大約50bP左右。pcr體系分別為： ddH2O 3.2ul 混合酶（買的） 5ul（每分鐘擴增1-2kB，預(yù)混loading buffer裝) 引物 1ul 模板DNA 0.8ul PCR參數(shù)： 94度 5min 94度 45s 55度 45s 72度 90s 72度 7min 4度 無窮 聚丙烯酰胺凝膠電泳配置(每板）： H20 30ml 母液（40%丙烯酰胺） 6ml 50xTAE緩沖液 300ul 10% APS 300ul TEMED 25ul 上樣量1.6ul 電壓120v 90min 結(jié)果有的可以跑出條帶，有的模糊不清，幾乎沒有，還有拖帶現(xiàn)象，具體如下圖所示，三圖來自不同的三種引物。 DNA樣，混合酶等問題可以排除，請問還可能問題出在哪？是引物的問題嗎？ 不能跑出.jpg 不能跑出條帶.jpg 可以跑出條帶.jpg |
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6樓2014-04-04 14:01:16
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