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稻草人的學(xué)習(xí)

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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轉(zhuǎn)化了都不成功，只長(zhǎng)出一個(gè)轉(zhuǎn)化子，怎么辦？
感受太制備方法是：
1.挑取單菌落至50mlYPD液體中，培養(yǎng)24小時(shí)左右，再轉(zhuǎn)接至50mlYPD中，使初始OD為0.2-0.3.培養(yǎng)至OD為1.2-1.3
2.冰浴30分鐘，離心，用50ml遇冷的無(wú)菌水洗，在用25ml無(wú)菌水洗。再后用1m山梨醇20ml懸浮。最后用0.35mll山梨醇懸浮分裝。

電擊：線(xiàn)性化質(zhì)粒7ul與80ul感受太混勻，轉(zhuǎn)入0.1cm遇冷電擊杯中，電擊條件1.5kv 電容25 電阻200

只長(zhǎng)出一個(gè)轉(zhuǎn)化子要么就不長(zhǎng) 不知道哦怎么繼續(xù)啦，請(qǐng)同學(xué)們幫忙

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1樓 2014-05-04 20:29:45

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稻草人的學(xué)習(xí)

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引用回帖:

5樓: Originally posted by heroxuning at 2014-05-05 15:37:58
0.1cm,我們實(shí)驗(yàn)室一般是750V

那電阻和電容分別是多少啊

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9樓2014-05-06 11:31:56

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玲林123

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★
kx444555: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2014-05-05 10:04:19

我也出現(xiàn)這種情況，感受態(tài)制備好像很重要的，現(xiàn)在我也還沒(méi)有成功

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2樓2014-05-05 08:18:20

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liyu0355

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【答案】應(yīng)助回帖

★
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kx444555: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2014-05-05 10:04:24

感受態(tài)最好現(xiàn)制現(xiàn)用；另外你加入的線(xiàn)性片段的量是多少？太少了也不行。

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3樓2014-05-05 08:54:56

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藍(lán)索道人

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【答案】應(yīng)助回帖

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我記得protocol上寫(xiě)的是需要5-10ug的線(xiàn)性化質(zhì)粒，當(dāng)然少點(diǎn)也行，你的只有7ul不知道質(zhì)粒濃度是多少？是不是量太少了。還有就是電壓，可以降低一些

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努力就有收獲！

4樓2014-05-05 15:10:54

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