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稻草人的學(xué)習(xí)銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
畢赤酵母電擊轉(zhuǎn)化ppic9k線性化 已有2人參與
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| ppic9k上面有兩個(gè)Bgl ii ,為什么線性化的時(shí)候可以選擇這個(gè)酶，切的時(shí)候就切成兩段啦，回收的時(shí)候回收哪段哪？ |
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luwei13566
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| bglII是用來(lái)在體外做串聯(lián)表達(dá)盒用的，本職作用并不是線性化的位點(diǎn)。 |
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稻草人的學(xué)習(xí)
3樓2014-06-03 21:42:24
稻草人的學(xué)習(xí)
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5樓2014-06-05 18:00:57
李小同
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| Invitrogen的說(shuō)明書上，9K是只能用SAC I或者SAL I線性化的啊 |
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2樓2014-06-03 21:02:51
稻草人的學(xué)習(xí)
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6樓2014-06-05 18:01:09
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7樓2014-06-11 16:57:59
luwei13566
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8樓2014-06-11 23:17:09
xiaoyue0453
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你好，我是設(shè)計(jì)雙酶切位點(diǎn)（EoRI,NotI），先在大腸里將目的基因與pPICZaB載體構(gòu)建好重組質(zhì)粒，將質(zhì)粒用EoRI酶單酶切后，用OMEGA cycle kit回收后電擊畢赤酵母，涂的平板是帶50ug/ml zeocin的YPD平板，是不是平板上長(zhǎng)出來(lái)的就是帶有目的基因的陽(yáng)性菌呢？我隨機(jī)挑長(zhǎng)出來(lái)的單克隆接種到5ml YPD（加50ug/ml zeocin）中卻長(zhǎng)不起來(lái)；另外，線性化的質(zhì)粒電擊后是整合到酵母基因組中，那提酵母的質(zhì)粒能提到嗎，我試著挑單克隆接種到Y(jié)PD中（忘了加抗生素），菌能長(zhǎng)出，將提取的質(zhì)粒做PCR,居然能P出目的條帶，但將該菌接種到加有抗生素的YPD中便長(zhǎng)不出來(lái)，請(qǐng)問(wèn)有高手知道原因嗎？ |
9樓2014-06-20 10:36:37
淵博震天
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10樓2018-05-25 09:35:55
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