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稻草人的學(xué)習(xí)銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
畢赤酵母電擊轉(zhuǎn)化ppic9k線性化 已有2人參與
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| ppic9k上面有兩個Bgl ii ,為什么線性化的時候可以選擇這個酶，切的時候就切成兩段啦，回收的時候回收哪段哪？ |
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你好，我是設(shè)計雙酶切位點（EoRI,NotI），先在大腸里將目的基因與pPICZaB載體構(gòu)建好重組質(zhì)粒，將質(zhì)粒用EoRI酶單酶切后，用OMEGA cycle kit回收后電擊畢赤酵母，涂的平板是帶50ug/ml zeocin的YPD平板，是不是平板上長出來的就是帶有目的基因的陽性菌呢？我隨機挑長出來的單克隆接種到5ml YPD（加50ug/ml zeocin）中卻長不起來；另外，線性化的質(zhì)粒電擊后是整合到酵母基因組中，那提酵母的質(zhì)粒能提到嗎，我試著挑單克隆接種到Y(jié)PD中（忘了加抗生素），菌能長出，將提取的質(zhì)粒做PCR,居然能P出目的條帶，但將該菌接種到加有抗生素的YPD中便長不出來，請問有高手知道原因嗎？ |
9樓2014-06-20 10:36:37
李小同
木蟲 (小有名氣)
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| Invitrogen的說明書上，9K是只能用SAC I或者SAL I線性化的啊 |
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稻草人的學(xué)習(xí)2樓2014-06-03 21:02:51
luwei13566
木蟲 (正式寫手)
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| bglII是用來在體外做串聯(lián)表達盒用的，本職作用并不是線性化的位點。 |
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3樓2014-06-03 21:42:24
稻草人的學(xué)習(xí)
銀蟲 (小有名氣)
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4樓2014-06-05 17:59:28
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