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旭旭大將軍

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[求助] 關(guān)于連接轉(zhuǎn)化的問(wèn)題已有6人參與

最近在做連接轉(zhuǎn)化，目的是測(cè)序，目的基因長(zhǎng)度在2000bp左右,用的連接試劑盒是天根，藍(lán)白斑篩選后做PCR還是沒(méi)有條帶，已經(jīng)做了很多次了，最近兩次轉(zhuǎn)化的板子上居然藍(lán)斑白斑均沒(méi)有，是空白的有兩個(gè)問(wèn)題：1、基因一直連不上的原因是什么 2、這兩次板子上什么都沒(méi)長(zhǎng)的原因是什么

謝謝各位幫忙解答！

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1樓 2014-06-08 23:55:44

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引用回帖:

6樓: Originally posted by 古月木木 at 2014-06-09 11:03:35
藍(lán)白斑篩選至少會(huì)長(zhǎng)出藍(lán)色標(biāo)記呀，2000bp不算長(zhǎng)，樓主可以換個(gè)ligase，可以試一下toyobo的快速連接酶，30min就可以了

所謂的快速連接只是噱頭，我用的neb的酶也能做到快速連接，但我一般連過(guò)夜，效果會(huì)好些

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7樓2014-06-09 11:29:14

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【答案】應(yīng)助回帖

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旭旭大將軍(kx444555代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-06-09 11:16:41

你要交代下你用的什么酶做PCR，連接體系之類的細(xì)節(jié)，我們才能幫到你

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2樓2014-06-09 00:13:04

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引用回帖:

2樓: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-09 00:13:04
你要交代下你用的什么酶做PCR，連接體系之類的細(xì)節(jié)，我們才能幫到你

PCR用的是老師帶回來(lái)的takara的PCRmix ，不清楚是否帶A，明天查一下。膠回收濃度是50 鏈接是 T ：1 DNA ： 4 水2 T4：1 buffer：1

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3樓2014-06-09 00:37:11

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引用回帖:

3樓: Originally posted by 旭旭大將軍 at 2014-06-09 00:37:11
PCR用的是老師帶回來(lái)的takara的PCRmix ，不清楚是否帶A，明天查一下。膠回收濃度是50 鏈接是 T ：1 DNA ： 4 水2 T4：1 buffer：1...

檢測(cè)的時(shí)候怎么做的？

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4樓2014-06-09 00:39:04

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