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wangxueflower木蟲 (小有名氣)
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[交流]
想檢測(cè)一個(gè)大約4kD 的小肽片段，western blot 一直沒有條帶怎么辦 已有6人參與
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最近一直在做一個(gè)4kD小肽片段的western, 試過一般的SDS-Page,也嘗試過tricine-SDS-page, 但是一直檢測(cè)不到條帶， 很是郁悶啊，這個(gè)小肽是一個(gè)前體蛋白經(jīng)過酶切后的產(chǎn)物。我用的抗體也是一般常用的特異性抗體。上樣量是30ug/孔。 是不是上樣量太少的原因啊? 還有是不是因?yàn)檫@個(gè)小肽的產(chǎn)量不高？ 轉(zhuǎn)膜方面， 我用的是100V 冰上轉(zhuǎn)膜一個(gè)半小時(shí)，是不是轉(zhuǎn)過了？ 請(qǐng)蟲友們給點(diǎn)建議吧 |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | 實(shí)驗(yàn)技術(shù) |
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wangxueflower
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4樓2014-06-12 15:59:45
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分子量小就用濃度大點(diǎn)的膠，電壓要看你膠轉(zhuǎn)膜的大小。分子量小轉(zhuǎn)膜會(huì)比較好轉(zhuǎn)，理論上時(shí)間有點(diǎn)長(zhǎng)，具體借鑒一下預(yù)染marker的情況。為確保wb沒問題。做個(gè)內(nèi)參吧 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
3樓2014-06-12 14:37:08
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我們用的電泳儀出現(xiàn)那種問題，一般是插頭接觸不好，需要你重新弄一下，還有就是兩塊板之間的電泳液少了，也會(huì)自動(dòng)斷電報(bào)錯(cuò)。。 |
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wangxueflower5樓2014-06-12 16:32:23
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