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zhaoxiaopang金蟲 (小有名氣)
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[求助]
酶切連接連不上，要死了 已有10人參與
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| 如題，最近構(gòu)建質(zhì)粒，載體是pIMP，使用的是單酶切位點(diǎn)Nde1.然后用一步克隆的方法做連接轉(zhuǎn)化，感受態(tài)是DH5&，做了四五次都是連不上，長(zhǎng)出來(lái)的單菌落做PCR結(jié)果目的條帶都P不出來(lái)，不知道是什么原因。換了新的一步克隆試劑盒做對(duì)比依然還是連不上，求大神分析分析啊。。。。。。 |
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 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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seven拂曉
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3樓2014-07-09 08:48:17
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zhaoxiaopang(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-07-11 11:09:43
zhaoxiaopang(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-07-11 11:09:43
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我的外源片段是8000bp（CLA1，PAC1雙切）想與腺病毒骨架（28000bp)連接，小弟目前已經(jīng)連接一年之久，但就是連接不上，每次轉(zhuǎn)化長(zhǎng)的斑很少，最多時(shí)也不超過30個(gè)。麻煩大神們幫幫，謝謝了。 目前我想到的方法有：1、換了商用化的DH5感受態(tài) 2、換了不同的腺病毒載體 3、換了不同的連接酶 4、摸過不同的連接比例 我認(rèn)為可能有點(diǎn)問題：1、我的酶切產(chǎn)物都是一直放在四度 ，有可能有部分降解。 |
5樓2014-07-09 15:30:24
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