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藍(lán)色泡沫321銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
目的基因與T載體連接后的保存問題 已有2人參與
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| 我的目的基因pcr后純化，轉(zhuǎn)天連接了T載體，但是在-20放了一個半月了，還能轉(zhuǎn)化大腸桿菌嗎，如果我直接用T載體測序可不可以進(jìn)行質(zhì)量驗證呢 |
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PCR-CL
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| 我以前也有過和你一樣的情況，就是連接之后放到-20度，我保存了一周，然后再轉(zhuǎn)化大腸就沒有菌落長出了。重復(fù)了好幾次，都是這樣。你可以轉(zhuǎn)化試一下，也許會有菌落長出，也許沒有。以后你可以連接之后放到4度保存，因為連接酶在4度是有活性的，所以多放一段時間，最多是體系一直在連接而已，這個我試過，放了4度一周，再轉(zhuǎn)化，能夠長出菌落。另外，連接產(chǎn)物測序理論上不可行，因為測序時，需要體系的DNA達(dá)到一定濃度，連接產(chǎn)物濃度未必夠。而且連接體系里面不僅有T-載體和你片段的連接產(chǎn)物，還有T載體自連產(chǎn)物，如果測序，即使?jié)舛葔蛄四軠y出來，那么也會是有兩個分不開的雙峰混在一起。建議涂IPTG和X-gal 加抗性平板，長出白斑，然后PCR驗證正確之后，送去測序。 |
2樓2014-07-11 21:01:22
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