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hajierlove銅蟲 (正式寫手)
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[求助]
菌液pcr,坐等求助 已有7人參與
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| 今天做的菌液pcr，三個(gè)基因挑了48個(gè)單克隆，做菌液pcr，引物是M13通用引物，出來的目的條帶都是250bp。750bp。目的片段是500bp。怎么回事？只能證明沒有連接上嗎？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
hajierlove(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-07-24 09:31:19
gyesang: 回帖置頂 2014-07-24 17:00:14
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
hajierlove(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-07-24 09:31:19
gyesang: 回帖置頂 2014-07-24 17:00:14
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你說條帶是同一孔有250+750還是有的是250有的是750？膠圖片可以放上來看一下 通用引物一般距離連接點(diǎn)都有幾十個(gè)bp的距離，上下游加起來差個(gè)一兩百是可能的，750bp有可能是對的 做菌液pcr最好是用通用引物和你的引物混搭，比如用通用上游引物和你的基因片段下游引物，當(dāng)然這樣子會導(dǎo)致你得到的陽性克隆減少一半。因?yàn)檫@是定向pcr，如果你的ORF克隆到載體里面是反向的話不會被擴(kuò)增。但是應(yīng)該可以給你足夠多的陽性克隆了。換別的搭配也行，這樣子的話準(zhǔn)確性會高一些 |
9樓2014-07-24 03:38:57
lijianfu12
銀蟲 (正式寫手)
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2樓2014-07-23 21:26:20
胡亞梅
新蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2014-07-23 21:40:31
4樓2014-07-23 22:23:16
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