 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3430 | 回復: 7 | |||||
[求助]
質(zhì)粒酶切條帶問題 已有2人參與
|
|
質(zhì)粒構(gòu)建好之后沒有做酶切鑒定，直接送去測序了，測序是正確的�？涩F(xiàn)在做雙酶切時總是有些問題。如圖： 1 marker 2 質(zhì)粒 3BamH1單酶切 4Xhol單酶切 5 雙酶切 BamH1酶切時大片段下面出現(xiàn)了兩條帶 xhol酶切時大片段上面還有一條條帶，是沒有切開的嗎？ 雙酶切時也出現(xiàn)了大片段下面的兩條帶。不知道這個是什么。 還有因為目的片段才200bp，所以前幾次做酶切時總是看不到，是因為太小了嗎？ 謝謝 2014-07-27酶切.jpg |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有274人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 質(zhì)粒分別酶切均有正確條帶，但雙酶切只有一條條帶，這是怎么回事？
已經(jīng)有5人回復
- 單酶切跟雙酶切電泳條帶一樣，且都比空質(zhì)粒跑的快，什么原因？
已經(jīng)有7人回復
- pet28a 空質(zhì)粒雙酶切圖像問題
已經(jīng)有15人回復
- Ecor Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切結(jié)果，目的條帶有，可是另一條帶比原來質(zhì)粒還要大，怎么解釋呢
已經(jīng)有6人回復
- 酶切后跑出的條帶這個樣子，是酶的問題嗎
已經(jīng)有6人回復
- 求助：質(zhì)粒酶切問題，質(zhì)粒被切飛了�。�！
已經(jīng)有24人回復
- 空質(zhì)粒雙酶切出現(xiàn)非常相近的兩條帶？轉(zhuǎn)化長滿板？
已經(jīng)有23人回復
- 測序正確，但是酶切沒有條帶，而且重組質(zhì)粒位置不對
已經(jīng)有3人回復
- 雙酶切后，質(zhì)粒條帶彌散
已經(jīng)有13人回復
- PET28a重組質(zhì)粒酶切后有三條？
已經(jīng)有10人回復
- 質(zhì)粒提取及酶切問題
已經(jīng)有4人回復
- 求去掉環(huán)狀質(zhì)粒中酶切位點和切后的質(zhì)粒連接問題？
已經(jīng)有7人回復
- 提取重組質(zhì)粒進行雙酶切之后什么條帶也沒有，怎么回事？？
已經(jīng)有7人回復
- 求助--雙酶切連接構(gòu)質(zhì)粒
已經(jīng)有15人回復
- 質(zhì)粒酶切之后電泳呈彌散狀是什么原因
已經(jīng)有16人回復
- 我構(gòu)建質(zhì)粒后酶切驗證的問題
已經(jīng)有13人回復
- 雙酶切后目的條帶的疑問？
已經(jīng)有8人回復
- 求助：重組質(zhì)粒酶切問題！請大家?guī)臀医鉀Q一下，急！
已經(jīng)有7人回復
- 提取的質(zhì)粒跑出四條或者五條帶，但酶切后只有一條帶，是不是我的質(zhì)粒污染了
已經(jīng)有18人回復
- 十萬火急，重組質(zhì)粒酶切只有一條帶，測序有結(jié)果，但反復說我質(zhì)粒濃度很低
已經(jīng)有16人回復
- 雙酶切沒出現(xiàn)目的條帶，呈彌散型，有圖，求助。
已經(jīng)有7人回復
- 質(zhì)粒單酶切出現(xiàn)兩條帶
已經(jīng)有18人回復
- 【求助/交流】質(zhì)粒單酶切后竟然兩條帶
已經(jīng)有32人回復
- 【求助/交流】求助、質(zhì)粒酶切沒有條帶？
已經(jīng)有18人回復
gyesang
榮譽版主 (著名寫手)
-
專家經(jīng)驗: +24 - MolEPI: 31
- 應(yīng)助: 599 (博士)
- 貴賓: 2.689
- 金幣: 24334.9
- 散金: 1088
- 紅花: 88
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 2327
- 在線: 623.1小時
- 蟲號: 849017
- 注冊: 2009-09-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞信號轉(zhuǎn)導
- 管轄: 分子生物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+4, 鼓勵交流 2014-07-28 08:42:23
coffee159: 金幣+3, ★★★很有幫助 2014-07-28 09:30:50
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+4, 鼓勵交流 2014-07-28 08:42:23
coffee159: 金幣+3, ★★★很有幫助 2014-07-28 09:30:50
|
DNA染色的亮度跟片段大小和分子數(shù)直接相關(guān)，由于你的片段很小，結(jié)合的燃料也很少，所以看上去不亮，從雙酶切的結(jié)果來看，是可以看到一個小條帶的，想看到更深的條帶，可以加大酶切質(zhì)粒的量 BamHI那個可能是非特異條帶，說不清楚 XhoI上面一個，你的質(zhì)粒那條泳道也有，可能是沒有切開的開環(huán)質(zhì)粒，總的來說，質(zhì)粒的質(zhì)量很好，沒有問題 |
2樓2014-07-27 22:09:04
luwei13566
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時
- 蟲號: 2380655
- 注冊: 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+4, 鼓勵交流 2014-07-28 08:42:27
coffee159: 金幣+4, ★★★很有幫助, 謝謝，因為當時是用重疊PCR的方法，通過pcr載體把目的基因插入的，所以沒辦法pcr驗證。還有，最近提的質(zhì)粒，大小8000bp,酶切后總是在15000作用有一條帶，我不清楚這個是什么原因。質(zhì)粒不純的話測序能測出來嗎？ 2014-07-28 09:36:07
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+4, 鼓勵交流 2014-07-28 08:42:27
coffee159: 金幣+4, ★★★很有幫助, 謝謝，因為當時是用重疊PCR的方法，通過pcr載體把目的基因插入的，所以沒辦法pcr驗證。還有，最近提的質(zhì)粒，大小8000bp,酶切后總是在15000作用有一條帶，我不清楚這個是什么原因。質(zhì)粒不純的話測序能測出來嗎？ 2014-07-28 09:36:07
|
1.BamHI酶切應(yīng)該是出現(xiàn)star活性了。你的基因才200bp，下面兩條帶肯定是切到載體上了，還有略微彌散，我記得這個酶穩(wěn)定性不好。最好不要長時間切。 2.XhoI上面那個帶和你的質(zhì)粒對照應(yīng)該是開環(huán)質(zhì)粒無誤。延長切割時間就消失掉了。 3.雙酶切下面那兩條帶還是BamHI的star活性，至于你下面那個不亮很正常，因為首先你的基因不一定完全釋放，可能一部分基因只是一端被切開，另一端還在載體上，就算你完全雙酶切后基因和載體的摩爾比是1比1，但是你的載體遠大于你的基因，嵌入的EB也遠比你基因多。 4.酶切效果不好可以換PCR驗證。 |
3樓2014-07-27 23:14:27
4樓2014-07-28 09:37:27
luwei13566
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時
- 蟲號: 2380655
- 注冊: 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
5樓2014-07-28 15:03:20
6樓2014-07-28 15:10:49
luwei13566
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時
- 蟲號: 2380655
- 注冊: 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
7樓2014-07-28 15:27:32
8樓2014-07-28 16:14:48
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 coffee159 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
 0854 考研調(diào)劑 招生了！AI 方向
+3
|
pk3725069 2026-03-19 | 13/650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +6 | Zhao anqi 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +7 | chuanzhu川燭 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070300，一志愿北航320求調(diào)劑 +3 | Jerry0216 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +12 | zjl的號 2026-03-16 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 能源材料化學課題組招收碩士研究生8-10名 +5 | 脫穎而出 2026-03-16 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學070300 學碩336求調(diào)劑 +5 | vv迷 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 化學調(diào)劑 +5 | yzysaa 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑0854 +3 | assdll 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿武漢理工材料工程專碩調(diào)劑 +9 | Doleres 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學材料求調(diào)劑，總分315（英一） +5 | sbdksD 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿南京航空航天大學289分 +3 | @taotao 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
295復試調(diào)劑
+8
|
簡木ChuFront 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學 學碩 354求調(diào)劑211或者雙一流 +3 | 我想要讀研究生 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +7 | 困于星晨 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑，是學校就去 +8 | sllhht 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 本科鄭州大學物理學院，一志愿華科070200學碩，346求調(diào)劑 +4 | 我不是一根蔥 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【同濟軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|