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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » WB和elisa結果不一致
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sophia-yxh銅蟲 (正式寫手)
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[求助]
WB和elisa結果不一致 已有1人參與
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目前本人一直在做IFN的融合蛋白，是通過酵母分泌表達所得；以前是用大腸桿菌包涵體表達的，通過復性獲得樣品，該樣品通過ELISA\WB檢測，以IFN抗體檢測的，均為陽性結果，且做抗病毒實驗，其抗病毒活性也和市場銷售的IFN在同一個數(shù)量級，但是不能達到我們的目標要求，所以選擇真核酵母分泌表達，想獲得IFN和另一個蛋白A的雙重作用； 酵母表達的IFN融合蛋白通過ELISA檢測是為陽性的，也是用IFN抗體的，我們是自己包板的；但是WB檢測卻總是陰性的，我們同時以以前原核表達的作為對照，對照每次WB的結果都很穩(wěn)定是陽性的，但是酵母分泌表達的卻很難做出陽性的，雖然也做出來1-2次，我現(xiàn)在由以下幾點擔心： 1.IFN從融合蛋白上脫落了； 2. IFN上有一個糖基化位點，是不是在真核中糖基化了，恰好遮住了抗體識別位點； 3.我是通過DAB顯色的，是不是顯色方式不正確； 請大家?guī)臀矣懻撚懻�，謝謝 |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
sophia-yxh(kx444555代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵交流 2014-08-08 13:51:03
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
sophia-yxh(kx444555代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵交流 2014-08-08 13:51:03
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估計是糖基化的原因，表位被蓋住了，你要換個系統(tǒng) [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
sophia-yxh2樓2014-08-08 13:13:10
| 祝福祝福祝福�。�！祝福祝福祝福！��！祝福祝福祝福�。�！祝福祝福祝福�。�！祝福祝福祝福�。�！ |
3樓2014-08-08 13:35:35
sophia-yxh
銅蟲 (正式寫手)
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4樓2014-08-11 19:09:52
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