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sophia-yxh銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
WB和elisa結(jié)果不一致 已有3人參與
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目前本人一直在做IFN的融合蛋白，是通過(guò)酵母分泌表達(dá)所得；以前是用大腸桿菌包涵體表達(dá)的，通過(guò)復(fù)性獲得樣品，該樣品通過(guò)ELISA\WB檢測(cè)，以IFN抗體檢測(cè)的，均為陽(yáng)性結(jié)果，且做抗病毒實(shí)驗(yàn)，其抗病毒活性也和市場(chǎng)銷(xiāo)售的IFN在同一個(gè)數(shù)量級(jí)，但是不能達(dá)到我們的目標(biāo)要求，所以選擇真核酵母分泌表達(dá)，想獲得IFN和另一個(gè)蛋白A的雙重作用； 酵母表達(dá)的IFN融合蛋白通過(guò)ELISA檢測(cè)是為陽(yáng)性的，也是用IFN抗體的，我們是自己包板的；但是WB檢測(cè)卻總是陰性的，我們同時(shí)以以前原核表達(dá)的作為對(duì)照，對(duì)照每次WB的結(jié)果都很穩(wěn)定是陽(yáng)性的，但是酵母分泌表達(dá)的卻很難做出陽(yáng)性的，雖然也做出來(lái)1-2次，我現(xiàn)在由以下幾點(diǎn)擔(dān)心： 1.IFN從融合蛋白上脫落了； 2. IFN上有一個(gè)糖基化位點(diǎn)，是不是在真核中糖基化了，恰好遮住了抗體識(shí)別位點(diǎn)； 3.我是通過(guò)DAB顯色的，是不是顯色方式不正確； 請(qǐng)大家?guī)臀矣懻撚懻�，謝謝 |
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sophia-yxh(金幣+1): 謝謝參與
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2樓2014-08-08 13:06:40
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sophia-yxh(金幣+1): 謝謝參與
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3樓2014-08-08 13:08:47
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sophia-yxh(金幣+1): 謝謝參與
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4樓2014-08-08 13:17:04
foxs2 
木蟲(chóng) (文壇精英)
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5樓2014-08-08 13:22:39
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sophia-yxh(金幣+1): 謝謝參與
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6樓2014-08-08 13:25:42
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sophia-yxh(金幣+1): 謝謝參與
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7樓2014-08-08 13:31:05
邴紹所
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8樓2014-08-08 13:33:14
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9樓2014-08-08 13:34:08
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10樓2014-08-08 13:39:26
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