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電轉(zhuǎn)化中感受態(tài)的制備用到哪些緩沖液 已有1人參與
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一直在做一個革蘭氏陰性菌的轉(zhuǎn)座子電擊轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)座效率低啊。感受態(tài)的制作都只用水洗細胞，水懸浮最終沉淀，想換電擊緩沖液考察下�？催^文獻其他的菌有用HEPES、PIPES之類的，這些是非離子緩沖液，主要是穩(wěn)定環(huán)境pH吧；還看到說Mg++會激活轉(zhuǎn)座酶什么的，想說是否要加MgCl2，但它是鹽，又怕影響電擊；還有用蔗糖、MOPES什么的。各種各樣的都有，原理還不太清楚。 轉(zhuǎn)座子貴啊，不敢亂試，好迷茫！ 大家電轉(zhuǎn)有用過什么其他緩沖液嗎？求推薦求指點！ |
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馨-馨
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2樓2014-08-11 14:24:02
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真的一定會擊穿？馨馨有沒聽過所謂的低滲溶液環(huán)境有利于感受態(tài)細胞的制作。是不是加低濃度的MgCl2就會沒事。The EZ-Tn5 Transposome can be electroporated into living cells where the EZ-Tn5 Transposase is activated by Mg2+ in the host’s cellular environment resulting in random insertion of the EZ-Tn5 Transposon into the host genomic DNA. 我的轉(zhuǎn)座子說明書里面有這么一句話，所以很疑心是否要用到Mg2+ |
3樓2014-08-11 15:24:56
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