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一旺百旺新蟲 (著名寫手)
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[求助]
測序的時候測序要求的選項怎么選? 已有6人參與
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測序要求有六個選項: 正向 反向 雙向 單向 單向測通 雙向測通 這六個選項都有什么區(qū)別呀,,,完全不懂,求教。。。。越詳細越好。。。完全的菜鳥一個 |
生物科學知識與技術 |
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至尊木蟲 (知名作家)
Translator and Proofreader
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如果你自己提供測序引物,就不存在這個問題了(測序引物決定了方向)。如果用公司的引物,則會有這個問題。就一般測序而言,測一個方向就夠了。 如果你要測定目標片段不是很大(如500bp左右),不管是正向還是反向都可以全部讀出了。所以選正向和反向沒有本質(zhì)區(qū)別。 如果你的目標DNA較大,而且需要全部測出序列,這時則可能需要正反方向同時測,以便把整個順序都讀出。 如果你做的是點突變或其他突變體,而突變位置又距離上下游插入點較遠,則可以在突變位置附近合成一測序引物,便于測序。 |
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樓主你好,我剛畢業(yè),在測序公司做技術服務的。你首先要根據(jù)你的樣品類型,如果你是PCR片段的話,一般是自己提供引物的,如果片段大小在800以內(nèi),如果沒有特殊結構,正向反向都是可以測通的。 如果你是菌液或質(zhì)粒的話,公司一般會有載體上的通用引物的,也是根據(jù)你的片段大小來的,你的插入片段比較小的話只要一個方向就基本能測通,如果在800-1500基本是2個方向也可以測通的,如果您的片段更大的話,你要求雙向測通,這時候公司會在測過兩個反應后給你設計引物繼續(xù)測通的,設計的引物是要收合成費的。 |

用戶注銷 (著名寫手)
新蟲 (著名寫手)
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