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一旺百旺新蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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測(cè)序的時(shí)候測(cè)序要求的選項(xiàng)怎么選？ 已有6人參與
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測(cè)序要求有六個(gè)選項(xiàng)： 正向 反向 雙向 單向 單向測(cè)通 雙向測(cè)通 這六個(gè)選項(xiàng)都有什么區(qū)別呀，，，完全不懂，求教。。。。越詳細(xì)越好。。。完全的菜鳥(niǎo)一個(gè) |
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gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流！ 2014-08-11 20:15:05
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2樓2014-08-11 17:59:21
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門(mén)吹雪170: 金幣-1, 屏蔽內(nèi)容, 亂碼 2014-08-13 22:49:38
西門(mén)吹雪170: 金幣-1, 屏蔽內(nèi)容, 亂碼 2014-08-13 22:49:38
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3樓2014-08-11 20:13:01
ssssllllnnnn 
至尊木蟲(chóng) (知名作家)
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西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-13 22:50:06
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西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-13 22:50:06
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如果你自己提供測(cè)序引物，就不存在這個(gè)問(wèn)題了（測(cè)序引物決定了方向）。如果用公司的引物，則會(huì)有這個(gè)問(wèn)題。就一般測(cè)序而言，測(cè)一個(gè)方向就夠了。 如果你要測(cè)定目標(biāo)片段不是很大（如500bp左右），不管是正向還是反向都可以全部讀出了。所以選正向和反向沒(méi)有本質(zhì)區(qū)別。 如果你的目標(biāo)DNA較大，而且需要全部測(cè)出序列，這時(shí)則可能需要正反方向同時(shí)測(cè)，以便把整個(gè)順序都讀出。 如果你做的是點(diǎn)突變或其他突變體，而突變位置又距離上下游插入點(diǎn)較遠(yuǎn)，則可以在突變位置附近合成一測(cè)序引物，便于測(cè)序。 |
4樓2014-08-11 21:13:56
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-13 22:50:44
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-13 22:50:44
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樓主你好，我剛畢業(yè)，在測(cè)序公司做技術(shù)服務(wù)的。你首先要根據(jù)你的樣品類型，如果你是PCR片段的話，一般是自己提供引物的，如果片段大小在800以內(nèi)，如果沒(méi)有特殊結(jié)構(gòu)，正向反向都是可以測(cè)通的。 如果你是菌液或質(zhì)粒的話，公司一般會(huì)有載體上的通用引物的，也是根據(jù)你的片段大小來(lái)的，你的插入片段比較小的話只要一個(gè)方向就基本能測(cè)通，如果在800-1500基本是2個(gè)方向也可以測(cè)通的，如果您的片段更大的話，你要求雙向測(cè)通，這時(shí)候公司會(huì)在測(cè)過(guò)兩個(gè)反應(yīng)后給你設(shè)計(jì)引物繼續(xù)測(cè)通的，設(shè)計(jì)的引物是要收合成費(fèi)的。 |
5樓2014-08-11 22:12:15
匿名
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-13 22:51:48
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-13 22:51:48
 本帖僅樓主可見(jiàn) |
6樓2014-08-12 02:53:21
一旺百旺
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7樓2014-08-12 08:16:00
zuoyly
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看說(shuō)明書(shū)吧，正向反向差不多，沒(méi)有什么區(qū)別；雙向就是一個(gè)正向一個(gè)反向，然后對(duì)結(jié)果進(jìn)行整合；單向就是單向測(cè)，沒(méi)有雙向測(cè)精確；一般測(cè)序超過(guò)800就測(cè)不準(zhǔn)了，需要設(shè)計(jì)中間引物什么的，這就是測(cè)通吧。。。 8樓2014-08-12 11:08:19
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