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[求助]
新手求助定量PCR具體實驗方法，謝謝各位指點！ 已有1人參與
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求各位大神指點！ 本人現(xiàn)在準備做熒光定量PCR，看了不少資料，但還是不太明白具體的實驗步驟該怎么做。 目的是測定不同菌株（相同種類）之間數(shù)個基因的表達量差異，準備用相對定量的方法，內參基因選的是16sRNA。 細菌RNA已經(jīng)提了，然后用的takala的盒子轉錄的DNA。接下來的實驗就不明白具體怎么做了，儀器是ABI的Step ONE。 時間很緊，在下很菜，請各位不吝賜教！ |
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
炒飯達人(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-08-28 22:01:26
炒飯達人: 金幣+17, ★★★★★最佳答案 2014-08-30 00:48:06
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1,內參試過沒？能用嗎？ 2，你的基因引物設計了嗎？200bp左右，有沒有普通pcr驗證過 3，反轉錄的時候rna定量了嗎？ 如果以上都完成了，那你就可以像做普通pcr那樣做了，不同的是 1，要用專門的酶，就是有SYBR的… 2.做陰性對照，和三個復孔 3,小心加樣，減少加樣誤差，復孔Ct不得大于0.5 差不多就這些吧 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2014-08-28 00:48:16
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littlefly1980
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5樓2014-10-13 13:13:25
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