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炒飯達(dá)人木蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
新手求助定量PCR具體實(shí)驗(yàn)方法，謝謝各位指點(diǎn)！ 已有1人參與
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求各位大神指點(diǎn)！ 本人現(xiàn)在準(zhǔn)備做熒光定量PCR，看了不少資料，但還是不太明白具體的實(shí)驗(yàn)步驟該怎么做。 目的是測(cè)定不同菌株（相同種類）之間數(shù)個(gè)基因的表達(dá)量差異，準(zhǔn)備用相對(duì)定量的方法，內(nèi)參基因選的是16sRNA。 細(xì)菌RNA已經(jīng)提了，然后用的takala的盒子轉(zhuǎn)錄的DNA。接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)就不明白具體怎么做了，儀器是ABI的Step ONE。 時(shí)間很緊，在下很菜，請(qǐng)各位不吝賜教！ |
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炒飯達(dá)人
木蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2014-08-28 09:29:58
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
炒飯達(dá)人(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-28 22:01:26
炒飯達(dá)人: 金幣+17, ★★★★★最佳答案 2014-08-30 00:48:06
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1,內(nèi)參試過(guò)沒(méi)？能用嗎？ 2，你的基因引物設(shè)計(jì)了嗎？200bp左右，有沒(méi)有普通pcr驗(yàn)證過(guò) 3，反轉(zhuǎn)錄的時(shí)候rna定量了嗎？ 如果以上都完成了，那你就可以像做普通pcr那樣做了，不同的是 1，要用專門的酶，就是有SYBR的… 2.做陰性對(duì)照，和三個(gè)復(fù)孔 3,小心加樣，減少加樣誤差，復(fù)孔Ct不得大于0.5 差不多就這些吧 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2014-08-28 00:48:16
4樓2014-08-28 11:11:09
littlefly1980
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5樓2014-10-13 13:13:25
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