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[求助]
求助qPCR,，引物的擴增效率，二聚體相關 已有2人參與
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初學QPCR，請大家多多指教，已經(jīng)問過實驗室的師兄了，不過依然有一些問題，還是不明白， 師兄說溶解曲線里是看不出引物二聚體峰的，但是我的空白對照三復孔之一出現(xiàn)了一個峰，我懷疑是引物二聚體峰。最后希望大家?guī)臀曳治鱿�，我這個引物能用嗎？或者如何改變PCR條件？在此謝謝木蟲的朋友們了！ 附圖如下： 擴增曲線 擴增效率圖 模板10倍稀釋溶解曲線峰 模板100倍稀釋溶解曲線峰 模板1000倍稀釋溶解曲線峰 模板10000倍稀釋溶解曲線峰 空白對照溶解曲線峰 |
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jurkat.1640
至尊木蟲 (文壇精英)
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4樓2014-09-04 11:28:04
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
lmc2537: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-09-03 17:53:48
lmc2537: 金幣+16 2014-09-29 20:26:25
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lmc2537: 金幣+16 2014-09-29 20:26:25
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樓主你好，我最近也在學習qpcr， 昨天剛做了一個標準曲線的實驗。首先從你上的圖看，你的pipetting還有待提高呀。盡量讓三個repeat都重合，這樣結(jié)果才可信。 從數(shù)值上來看 你的斜率不到3.3，擴增效率不是特別好。我的電腦只看到了模板稀釋10倍的溶解曲線，只有一個主峰，應該沒有引物二聚體的出現(xiàn)，你可以把做過qpcr的反應在電泳上跑下看看，是不是一條條帶。。 我也是初學者，第一次回帖幫別人，希望能對你游泳呀！  |
2樓2014-09-02 21:56:13
3樓2014-09-03 17:53:33
5樓2014-09-04 14:48:54
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