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[求助]
求助qPCR,，引物的擴(kuò)增效率，二聚體相關(guān) 已有2人參與
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初學(xué)QPCR，請大家多多指教，已經(jīng)問過實(shí)驗(yàn)室的師兄了，不過依然有一些問題，還是不明白， 師兄說溶解曲線里是看不出引物二聚體峰的，但是我的空白對照三復(fù)孔之一出現(xiàn)了一個(gè)峰，我懷疑是引物二聚體峰。最后希望大家?guī)臀曳治鱿�，我這個(gè)引物能用嗎？或者如何改變PCR條件？在此謝謝木蟲的朋友們了！ 附圖如下： 擴(kuò)增曲線 擴(kuò)增效率圖 模板10倍稀釋溶解曲線峰 模板100倍稀釋溶解曲線峰 模板1000倍稀釋溶解曲線峰 模板10000倍稀釋溶解曲線峰 空白對照溶解曲線峰 |
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5樓2014-09-04 14:48:54
呆的呆
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樓主你好，我最近也在學(xué)習(xí)qpcr， 昨天剛做了一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)驗(yàn)。首先從你上的圖看，你的pipetting還有待提高呀。盡量讓三個(gè)repeat都重合，這樣結(jié)果才可信。 從數(shù)值上來看 你的斜率不到3.3，擴(kuò)增效率不是特別好。我的電腦只看到了模板稀釋10倍的溶解曲線，只有一個(gè)主峰，應(yīng)該沒有引物二聚體的出現(xiàn)，你可以把做過qpcr的反應(yīng)在電泳上跑下看看，是不是一條條帶。。 我也是初學(xué)者，第一次回帖幫別人，希望能對你游泳呀！  |
2樓2014-09-02 21:56:13
3樓2014-09-03 17:53:33
jurkat.1640
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4樓2014-09-04 11:28:04
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