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lu12306新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
用基因組DNA擴(kuò)增某個(gè)基因效率怎樣？ 已有1人參與
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最近一直在做提取DNA直接以DNA作為PCR模板擴(kuò)增目的基因，設(shè)退貨溫度梯度，一直沒(méi)擴(kuò)增出來(lái)。郁悶呀！ 這與提RNA反轉(zhuǎn)錄作PCR模板有什么區(qū)別嗎？比如說(shuō)擴(kuò)增效率方面，是不是以含內(nèi)含子的DNA為模板PCR效率低，難擴(kuò)增。 還有就是就算以DNA為模板擴(kuò)增出基因，是不是還得提RNA反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增驗(yàn)證呀？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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lu12306(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-09-11 09:23:29
lu12306(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-09-11 09:23:29
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看你的題目回答： 基因組DNA擴(kuò)增的效率取決于多個(gè)方面，但主要有： 1. 基因組的一級(jí)結(jié)構(gòu)，比如GC含量，比如重復(fù)序列等都會(huì)極大影響擴(kuò)增； 2. 基因組的長(zhǎng)度，如果超過(guò)5k，則需要注意用比較好的一點(diǎn)的Taq酶進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。 看你的內(nèi)容回答： 通常來(lái)說(shuō)，cDNA做模版肯定要效率高些，因?yàn)闆](méi)有內(nèi)含子，但兩種方式的目的是完全不一樣的，不知道你要做什么？ 你說(shuō)的用基因組擴(kuò)增后還要用RNA驗(yàn)證，恕不知道你在表達(dá)什么，通常沒(méi)有你這樣的說(shuō)法。 |
2樓2014-09-11 08:20:48
lu12306
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 10.4
- 散金: 16
- 帖子: 33
- 在線: 17小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3372811
- 注冊(cè): 2014-08-19
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
3樓2014-09-11 14:49:02
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