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這樣的引物能做熒光定量PCR嗎？ 已有3人參與
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圖為熒光定量引物的驗證。從左到右依次為Marker DL5000、引物1、引物2、內參GAPDH。雖說目的條帶跑出來了，但最下方引物二聚體也很明顯，包括內參也存在引物二聚體，三對引物PCR反應的退火溫度分別為53℃、55℃、57℃，后來又試著把三對的退火溫度統(tǒng)一設為60℃，依舊出現(xiàn)引物二聚體。這種情況下引物還能用做熒光定量PCR嗎？ 引物具體信息如下：（1-F %GC為40%，TM值為53.7；1-R %GC為40%，TM值為53.7）；（2-F %GC為45%，TM值為55.8；2-R %GC為40%，TM值為53.7）；（GAPDH-F %GC為61.1%，TM值為59.6；GAPDH-R %GC為50%，TM值為57.8.） 20140912.jpg |
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