趙曉楠zxn

金蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 1279
紅花: 3
帖子: 45
在線: 16.4小時(shí)
蟲號(hào): 2464848
注冊(cè): 2013-05-15
性別: MM
專業(yè): 畜牧學(xué)

[求助] 這樣的引物能做熒光定量PCR嗎？已有3人參與

圖為熒光定量引物的驗(yàn)證。從左到右依次為Marker DL5000、引物1、引物2、內(nèi)參GAPDH。雖說目的條帶跑出來了，但最下方引物二聚體也很明顯，包括內(nèi)參也存在引物二聚體，三對(duì)引物PCR反應(yīng)的退火溫度分別為53℃、55℃、57℃，后來又試著把三對(duì)的退火溫度統(tǒng)一設(shè)為60℃，依舊出現(xiàn)引物二聚體。這種情況下引物還能用做熒光定量PCR嗎？
引物具體信息如下：（1-F %GC為40%，TM值為53.7；1-R %GC為40%，TM值為53.7）；（2-F %GC為45%，TM值為55.8；2-R %GC為40%，TM值為53.7）；（GAPDH-F %GC為61.1%，TM值為59.6；GAPDH-R %GC為50%，TM值為57.8.）

20140912.jpg

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有235人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)
留學(xué)--博士招生已經(jīng)有16人回復(fù)
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限已經(jīng)有4人回復(fù)
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物已經(jīng)有8人回復(fù)
請(qǐng)幫忙設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物已經(jīng)有7人回復(fù)
你們的熒光定量檢測(cè)引物擴(kuò)增的標(biāo)準(zhǔn)曲線問題！求指教已經(jīng)有4人回復(fù)
熒光定量PCR引物設(shè)計(jì) 已經(jīng)有8人回復(fù)
microRNA的熒光定量PCR 已經(jīng)有4人回復(fù)
關(guān)于熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)的問題已經(jīng)有7人回復(fù)
新人做qRT-PCR 引物怎么設(shè)計(jì)？已經(jīng)有5人回復(fù)
定量PCR-引物二聚體問題已經(jīng)有5人回復(fù)
使用多對(duì)引物進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR后未得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是否能說明目的基因不表達(dá)？已經(jīng)有10人回復(fù)
關(guān)于實(shí)時(shí)熒光定量引物設(shè)計(jì) 已經(jīng)有5人回復(fù)
SYBR熒光定量的溶解曲線已經(jīng)有10人回復(fù)
大家做RT-qPCR設(shè)計(jì)引物用的什么軟件呀？已經(jīng)有15人回復(fù)
PCR的正向引物和反向引物可以一起存放嗎? 已經(jīng)有19人回復(fù)
能不能只用一條引物做不對(duì)稱PCR？已經(jīng)有11人回復(fù)
PCR的引物擴(kuò)增后會(huì)被降解掉嗎？已經(jīng)有10人回復(fù)
定量引物擴(kuò)增特異性檢測(cè) 已經(jīng)有1人回復(fù)
兩種引物的PCR電泳圖，做了多次還是不解已經(jīng)有18人回復(fù)
PCR最短可以P多少bp，求大家?guī)臀以O(shè)計(jì)引物！已經(jīng)有7人回復(fù)
做RT-PCR的戰(zhàn)友們，內(nèi)標(biāo)定量怎么做？已經(jīng)有18人回復(fù)
實(shí)時(shí)定量PCR 數(shù)據(jù)處理已經(jīng)有7人回復(fù)
【求助/交流】實(shí)時(shí)定量pcr引物設(shè)計(jì)問題？是否一定要跨內(nèi)含子！已經(jīng)有3人回復(fù)
【求助/交流】熒光定量PCR與半定量的RT－PCR在設(shè)計(jì)引物時(shí)有什么區(qū)別？已經(jīng)有8人回復(fù)
【求助/交流】做實(shí)時(shí)定量PCR需要校正內(nèi)參嗎？已經(jīng)有9人回復(fù)
【求助/交流】為什么PCR引物不能反復(fù)凍融？后果會(huì)是怎樣已經(jīng)有20人回復(fù)
【求助/交流】熒光定量PCR引物跨內(nèi)含子的問題已經(jīng)有9人回復(fù)

在學(xué)術(shù)的汪洋里，撲騰。

1樓 2014-09-14 16:52:49

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

wangranjun

榮譽(yù)版主 (知名作家)

廣庭之惘然

專家經(jīng)驗(yàn): +106
應(yīng)助: 108 (高中生)
貴賓: 2.351
金幣: 33457.9
散金: 3850
紅花: 153
沙發(fā): 8
帖子: 5316
在線: 1310.2小時(shí)
蟲號(hào): 2234819
注冊(cè): 2013-01-11
性別: GG
專業(yè): 藥物毒理
管轄: 文學(xué)芳草園

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-14 23:50:11
趙曉楠zxn: 金幣+3, ★有幫助 2014-09-15 17:05:10

沒有雜帶理論上可以做定量的，再重新設(shè)計(jì)一下退火溫度就好了，引物二聚體的出現(xiàn)很大程度是因?yàn)橥嘶饻囟炔缓线m……住順利！

贊一下

回復(fù)此樓

他日揚(yáng)翼九萬里，歷大千世界，定我紅塵心！

2樓2014-09-14 18:31:04

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

dxh86412

銅蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
金幣: 180.8
帖子: 49
在線: 42.5小時(shí)
蟲號(hào): 2003142
注冊(cè): 2012-09-15
性別: GG
專業(yè): 臨床獸醫(yī)學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
趙曉楠zxn: 金幣+5, ★有幫助 2014-09-15 08:40:43

最好能夠沒有二聚體，因?yàn)槎垠w主要影響擴(kuò)增效率，但是如果沒辦法的話，方便的話做個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線看下擴(kuò)增效率怎么樣，如果在95-105%之間，那用來做定量肯定沒問題，如果太低或太高，就只能重新設(shè)計(jì)了。還有你也可以提高退火溫度試試，一般都要在60左右的~

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2014-09-15 00:24:15

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

趙曉楠zxn

金蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 1279
紅花: 3
帖子: 45
在線: 16.4小時(shí)
蟲號(hào): 2464848
注冊(cè): 2013-05-15
性別: MM
專業(yè): 畜牧學(xué)

引用回帖:

3樓: Originally posted by dxh86412 at 2014-09-15 00:24:15
最好能夠沒有二聚體，因?yàn)槎垠w主要影響擴(kuò)增效率，但是如果沒辦法的話，方便的話做個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線看下擴(kuò)增效率怎么樣，如果在95-105%之間，那用來做定量肯定沒問題，如果太低或太高，就只能重新設(shè)計(jì)了。還有你也可以提 ...

我也提高過退火溫度，60度，但是還是出現(xiàn)了二聚體。頭疼，熒光定量我沒做過，好難啊。

贊一下

回復(fù)此樓

在學(xué)術(shù)的汪洋里，撲騰。

4樓2014-09-15 08:42:55

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木蟲 (文壇精英)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 908 (博后)
金幣: 17177
散金: 1654
紅花: 121
沙發(fā): 41
帖子: 14525
在線: 2184.9小時(shí)
蟲號(hào): 514340
注冊(cè): 2008-02-28
性別: GG
專業(yè): 病毒學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
趙曉楠zxn: 金幣+2, ★有幫助 2014-09-15 17:05:16

引物二聚體產(chǎn)生本底熒光，減少用量就行。

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2014-09-15 12:39:20

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

趙曉楠zxn

金蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 1279
紅花: 3
帖子: 45
在線: 16.4小時(shí)
蟲號(hào): 2464848
注冊(cè): 2013-05-15
性別: MM
專業(yè): 畜牧學(xué)

引用回帖:

5樓: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-09-15 12:39:20
引物二聚體產(chǎn)生本底熒光，減少用量就行。

不是說引物二聚體影響擴(kuò)增效率嗎，你的意思是減少引物的用量嗎？

贊一下

回復(fù)此樓

在學(xué)術(shù)的汪洋里，撲騰。

6樓2014-09-15 17:04:48

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

running113

木蟲 (著名寫手)

應(yīng)助: 23 (小學(xué)生)
金幣: 4213.9
散金: 67
紅花: 1
帖子: 1217
在線: 267.4小時(shí)
蟲號(hào): 1777690
注冊(cè): 2012-04-25
性別: GG
專業(yè): 醫(yī)學(xué)心理學(xué)

可以先做一下，看條帶效果還是可以的。

[ 發(fā)自小木蟲客戶端 ]

贊一下

回復(fù)此樓

SCI我來了�。�！

7樓2014-09-15 17:35:04

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木蟲 (文壇精英)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 908 (博后)
金幣: 17177
散金: 1654
紅花: 121
沙發(fā): 41
帖子: 14525
在線: 2184.9小時(shí)
蟲號(hào): 514340
注冊(cè): 2008-02-28
性別: GG
專業(yè): 病毒學(xué)

引用回帖:

6樓: Originally posted by 趙曉楠zxn at 2014-09-15 17:04:48
不是說引物二聚體影響擴(kuò)增效率嗎，你的意思是減少引物的用量嗎？...

減少引物。引物二聚體其實(shí)可以增加PCR的特異性

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2014-09-16 08:52:43

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

zhangyunjing

金蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 72 (初中生)
金幣: 1513.9
紅花: 7
帖子: 202
在線: 164.5小時(shí)
蟲號(hào): 1952690
注冊(cè): 2012-08-23
性別: MM
專業(yè): 理論法學(xué)

膠圖上的電泳結(jié)果你是不是采用常規(guī)的Taq酶，如果是的話，建議你采用熒光定量的Mix做個(gè)PCR，跑膠看一下，因?yàn)榇蟛糠值臒晒舛康腗ix中是使用的熱啟動(dòng)酶，這很好的減少引物二聚體的生成和非特異性擴(kuò)增。

贊一下

回復(fù)此樓

» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）

趙曉楠zxn

rainwater

9樓2014-09-17 08:44:51

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

趙曉楠zxn

金蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 1279
紅花: 3
帖子: 45
在線: 16.4小時(shí)
蟲號(hào): 2464848
注冊(cè): 2013-05-15
性別: MM
專業(yè): 畜牧學(xué)

送紅花一朵

引用回帖:

9樓: Originally posted by zhangyunjing at 2014-09-17 08:44:51
膠圖上的電泳結(jié)果你是不是采用常規(guī)的Taq酶，如果是的話，建議你采用熒光定量的Mix做個(gè)PCR，跑膠看一下，因?yàn)榇蟛糠值臒晒舛康腗ix中是使用的熱啟動(dòng)酶，這很好的減少引物二聚體的生成和非特異性擴(kuò)增。

是的，我是先用普通PCR的Taq酶擴(kuò)的。很有幫助，謝謝。

贊一下

回復(fù)此樓

在學(xué)術(shù)的汪洋里，撲騰。

10樓2014-09-20 18:33:31

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 311求調(diào)劑 +6	冬十三 2026-03-24	6/300	2026-03-29 20:45 by 無際的草原
[考研] 329求調(diào)劑，一志愿西北工業(yè)大學(xué)，材料工程（085601） +4	小小機(jī)靈蟲 2026-03-29	10/500	2026-03-29 18:20 by 無際的草原
[考研] 一志愿：西北大學(xué)，英一數(shù)一408-284分求調(diào)劑 +4	12.27 2026-03-27	4/200	2026-03-29 14:40 by zhshch
[考研] 332求調(diào)劑 +8	蕉蕉123 2026-03-28	8/400	2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 330分求調(diào)劑 +5	qzenlc 2026-03-29	5/250	2026-03-29 07:37 by 無際的草原
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +6	崔wj 2026-03-26	6/300	2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 一志愿211 初試270分求調(diào)劑 +8	谷雨上岸 2026-03-23	9/450	2026-03-29 01:00 by 我是小康
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求導(dǎo)師收 +9	天天好運(yùn)來上岸?/a> 2026-03-24	10/500	2026-03-28 22:17 by chemzp
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩，一志愿湖南大學(xué)，初試成績(jī)338 +6	YYYYYNNNNN 2026-03-26	7/350	2026-03-28 20:52 by 唐沐兒
[考研] 一志愿廈門大學(xué)化學(xué)學(xué)碩307求調(diào)劑 +10	y7czhao 2026-03-26	10/500	2026-03-28 14:23 by 唐沐兒
[考研] 291求調(diào)劑 +6	HanBeiNingZC 2026-03-24	6/300	2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 279 分求調(diào)劑 +4	睡個(gè)好覺_16 2026-03-24	4/200	2026-03-27 15:05 by 醉在風(fēng)里
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +10	你好明天你好 2026-03-23	12/600	2026-03-27 14:43 by shangxh
[考研] 348求調(diào)劑 +4	小懶蟲不懶了 2026-03-27	5/250	2026-03-27 12:47 by 果果媽咪
[考研] 求調(diào)劑 +3	劉柯@ 2026-03-24	4/200	2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 315調(diào)劑 +4	0860求調(diào)劑 2026-03-26	5/250	2026-03-27 11:23 by wangjy2002
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3	丹青奶蓋 2026-03-26	5/250	2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3	崔wj 2026-03-26	3/150	2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 086003食品工程求調(diào)劑 +6	淼淼111 2026-03-24	6/300	2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 318求調(diào)劑 +3	plum李子 2026-03-23	3/150	2026-03-25 09:42 by 霧散后相遇lc