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hihe99銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR產(chǎn)物測序重疊峰問題 已有3人參與
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我用相同的DNA做兩次PCR，產(chǎn)物膠回收送測序，兩個樣品的測序結(jié)果都是后面形成雙峰（圖4），還是相同的位置，而且我看前面的相同位置也有重疊峰（圖1-3），請問這是什么原因啊？該怎么解決，謝謝！PS CR用的酶是primerstar1.jpg 2.jpg 3.jpg 4.jpg |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金幣+4, 鼓勵回帖交流！ 2014-09-19 23:42:43
hihe99: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-09-26 10:50:50
gyesang: 金幣+4, 鼓勵回帖交流！ 2014-09-19 23:42:43
hihe99: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-09-26 10:50:50
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你這種情況推測可能是這個原因造成的：DNA的多態(tài)性，大家都知道，不同的品種基因組DNA會有差異的，類似SSR、SNP這樣的分子標記就是因為不同品種間DNA存在差異，所以我推測你提取DNA的材料可能是雜交材料或者至少不是純種，你拉取的這一段剛好存在序列差異，PCR拉出的產(chǎn)物自然就有兩種類型了，測序出現(xiàn)重疊峰也就正常了，而且一定是出現(xiàn)在同一個地方。 建議：不要送PCR產(chǎn)物測序，將其克隆到載體上（如pMD-18T）再行測序，由于挑的是單菌落，不會出現(xiàn)重疊峰的，而且都測幾個樣，可以講出現(xiàn)差異的序列各找出來，根據(jù)同源比對還可以找出樣品可能的親本來源。 個人意見，僅供參考 |
5樓2014-09-19 22:05:04
huyan0817
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3樓2014-09-18 15:31:00
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4樓2014-09-19 18:32:58
gyesang
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6樓2014-09-19 23:44:50
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