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胡琴HuQin新蟲 (小有名氣)
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[求助]
Taqman熒光定量PCR跑出來的曲線出現(xiàn)了各種問題，不知問題出在哪兒 已有3人參與
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本人最近在做探針法熒光定量RT-PCR,但是跑出來的圖形各種奇怪。我不知道問題出在了哪里，該怎樣分析和改進(jìn)？望善良智慧的蟲友們能幫我分析分析，提提意見！我在此謝謝大家了！ Y6939A%KI5I7{301W%`6R%G.jpg |
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xipha
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2樓2014-09-24 01:24:28
胡琴HuQin
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3樓2014-09-24 07:15:19
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
胡琴HuQin: 金幣+3 2014-09-24 20:09:42
胡琴HuQin: 金幣+3 2014-09-24 20:09:42
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不好意思我沒有用過FAM標(biāo)記. 這個(gè)圖看著有點(diǎn)摸不著頭腦,也不知道是哪里的問題. 不過你的樣品如果在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性區(qū)那也就無所謂了,另外你能把擴(kuò)增效率曲線做一下看看擴(kuò)增效率么(Ct/quantity)?還有就是如果低濃度的標(biāo)曲拉不開的話,你批一個(gè)高濃度系列的表曲試試擴(kuò)增效率. 看看是不是就是目標(biāo)濃度低于檢測(cè)體系靈敏度了. 不過一般做低濃度標(biāo)曲都會(huì)有一個(gè)起飛Ct高于25的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的. |
4樓2014-09-24 10:32:26
胡琴HuQin
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