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小朱大寶新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
PCR反應(yīng)體系改變會(huì)導(dǎo)致電泳不出帶嗎 已有2人參與
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 以反轉(zhuǎn)錄后的cDNA為模板，在擴(kuò)增管家基因（18s RNA）的時(shí)候，剛開(kāi)始用的是10μl反應(yīng)體系，體系中用的是PCR Mix，電泳后有出現(xiàn)條帶。但由于是新手的關(guān)系，忘記加空白對(duì)照跟Marker，加上電泳時(shí)間長(zhǎng)了一點(diǎn)，所以無(wú)法確定P出來(lái)的條帶是否為目的的管家基因。因此，后來(lái)又重新做了一次實(shí)驗(yàn)，這次用的是25μl反應(yīng)體系，而且沒(méi)有用PCR Mix，用的是HSTaq酶。就只是改變了反應(yīng)體系，PCR反應(yīng)條件一直沒(méi)有改變，但是電泳后跑不出條帶。10μl反應(yīng)體系： 25μl反應(yīng)體系: PCR Mix 5 10X Buffer 2.5 Pf 0.2 dNTPs 2 pr 0.2 pf 0.2 cDNA 0.5 pr 0.5 ddH2O 4.1 Taq 0.125 cDNA 1 ddH2O 18.675 total 10 μl total 25μl 請(qǐng)問(wèn)各位高手，是哪里出了問(wèn)題。 10μl反應(yīng)體系電泳圖.jpg |
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peterrjp
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【答案】應(yīng)助回帖
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小朱大寶: 金幣+3 2014-10-21 14:26:23
| 跟體系的擴(kuò)大沒(méi)關(guān)系。應(yīng)該跟你用的試劑不同有關(guān)。你第一次用的mix，又沒(méi)有加對(duì)照，無(wú)法確定是不是mix本身污染導(dǎo)致的條帶。第二次用的HSTaq酶體系，沒(méi)有陽(yáng)性對(duì)照，不能排除試劑是否有問(wèn)題，比如酶失活了。你這個(gè)圖是第一次還是第二次？ |
2樓2014-10-20 16:42:02
小朱大寶
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3樓2014-10-20 17:21:04
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4樓2014-10-20 19:27:51
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5樓2014-10-21 01:21:31
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6樓2015-01-17 00:17:34
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7樓2015-01-18 16:51:14
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