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張永婧1991新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
T-RFLP中回收及酶切相關(guān)問(wèn)題 已有4人參與
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我做的是腸道微生物多態(tài)性，用T-RFLP技術(shù)，已經(jīng)提取出基因組總DNA，PCR體系為25ul,用通用引物擴(kuò)增出目的片段，1500bp左右，條帶較亮且單一，無(wú)引物二聚體等其他雜物，然后用2%的瓊脂糖凝膠跑電泳做切膠回收，用的是Axygen的凝膠回收試劑盒，每次每孔回收上樣量為10ul，然后將3個(gè)孔的條帶切膠回收，回收后的DNA濃度卻只有10ng/ul左右，用過(guò)天根的試劑盒也是基本上差不多。然后看到論壇上有人說(shuō)單一條帶可以不同切膠回收直接就酶切就可以，于是按照酶切體系進(jìn)行酶切，PCR產(chǎn)物用5ul,酶用1ul。結(jié)果還是沒(méi)有條帶，正常情況如果不酶切的話，那條目的條帶應(yīng)該是存在的吧，但是酶切之后沒(méi)有，說(shuō)明是切開(kāi)了？可是什么小條帶都看不見(jiàn)。。還有就是如果直接PCR產(chǎn)物酶切的話，這個(gè)產(chǎn)物還要做什么預(yù)處理嗎？求求各位大神，這些都快做了一個(gè)月了，還是沒(méi)有結(jié)果。。。快哭了呀！以前沒(méi)接觸過(guò)分子，望大神指導(dǎo)！圖1是回收后做酶切的條帶，就是這種情況。 圖1.jpg |
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 Alphard 02 |
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4樓2014-10-26 10:48:46
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