版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門版塊排行榜

返回列表

下一頁(yè)

張永婧1991

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 148.5
帖子: 19
在線: 21小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2510060
注冊(cè): 2013-06-16
專業(yè): 畜牧學(xué)

[求助] T-RFLP中回收及酶切相關(guān)問(wèn)題已有4人參與

我做的是腸道微生物多態(tài)性，用T-RFLP技術(shù)，已經(jīng)提取出基因組總DNA，PCR體系為25ul,用通用引物擴(kuò)增出目的片段，1500bp左右，條帶較亮且單一，無(wú)引物二聚體等其他雜物，然后用2%的瓊脂糖凝膠跑電泳做切膠回收，用的是Axygen的凝膠回收試劑盒，每次每孔回收上樣量為10ul，然后將3個(gè)孔的條帶切膠回收，回收后的DNA濃度卻只有10ng/ul左右，用過(guò)天根的試劑盒也是基本上差不多。然后看到論壇上有人說(shuō)單一條帶可以不同切膠回收直接就酶切就可以，于是按照酶切體系進(jìn)行酶切，PCR產(chǎn)物用5ul,酶用1ul。結(jié)果還是沒(méi)有條帶，正常情況如果不酶切的話，那條目的條帶應(yīng)該是存在的吧，但是酶切之后沒(méi)有，說(shuō)明是切開(kāi)了？可是什么小條帶都看不見(jiàn)。。還有就是如果直接PCR產(chǎn)物酶切的話，這個(gè)產(chǎn)物還要做什么預(yù)處理嗎？求求各位大神，這些都快做了一個(gè)月了，還是沒(méi)有結(jié)果。。�？炜蘖搜�！以前沒(méi)接觸過(guò)分子，望大神指導(dǎo)！圖1是回收后做酶切的條帶，就是這種情況。

圖1.jpg

回復(fù)此樓

» 收錄本帖的淘帖專輯推薦

Alphard 02

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有131人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

PCR得到單一條帶后能不能不回收，直接酶切已經(jīng)有4人回復(fù)
關(guān)于雙酶切的酶的失活問(wèn)題已經(jīng)有6人回復(fù)
基因組酶切問(wèn)題！急！已經(jīng)有7人回復(fù)
怎么預(yù)期酶切產(chǎn)物的大小？已經(jīng)有8人回復(fù)
用T-RFLP的大俠已經(jīng)有8人回復(fù)
PBI121載體酶切后回收已經(jīng)有28人回復(fù)
急求酶切，回收及連接詳細(xì)操作步驟已經(jīng)有10人回復(fù)
T載體與目的片段大小一致時(shí),怎么酶切回收啊已經(jīng)有10人回復(fù)
關(guān)于雙酶切后回收的問(wèn)題已經(jīng)有12人回復(fù)
t載體酶切問(wèn)題已經(jīng)有15人回復(fù)
雙酶切后液體回收已經(jīng)有3人回復(fù)
雙酶切后切膠回收已經(jīng)有34人回復(fù)
提取質(zhì)粒之后又三條帶, 需要切膠回收未開(kāi)環(huán)DNA再進(jìn)行酶切嗎? 已經(jīng)有10人回復(fù)
關(guān)于SphI酶的酶切問(wèn)題已經(jīng)有7人回復(fù)
T-RFLP檢測(cè)峰值太少已經(jīng)有7人回復(fù)
雙酶切后目的條帶很淡，回收不到已經(jīng)有15人回復(fù)
分步酶切回收不到片段已經(jīng)有4人回復(fù)
酶切之后跑回收膠總是沒(méi)有條帶是怎么回事呢已經(jīng)有9人回復(fù)
請(qǐng)教PCR產(chǎn)物酶切后是否可以直接過(guò)柱純化而不膠回收？已經(jīng)有15人回復(fù)
PCR產(chǎn)物凝膠回收、酶切等問(wèn)題請(qǐng)教已經(jīng)有7人回復(fù)
純化后酶切產(chǎn)物的保存已經(jīng)有10人回復(fù)
129bp小片段從pGEM-T上酶切回收的問(wèn)題已經(jīng)有13人回復(fù)
【求助/交流】T-RFLP酶切產(chǎn)物存放時(shí)間問(wèn)題已經(jīng)有6人回復(fù)
【求助/交流】DNA酶切回收跑膠怎么有小條帶�。縖已經(jīng)有8人回復(fù)
【求助/交流】請(qǐng)教一下大家的酶切時(shí)間是多久已經(jīng)有8人回復(fù)

1樓 2014-10-25 16:28:06

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

回帖支持 ( 顯示支持度最高的前 50 名 )

j2

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 56 (初中生)
金幣: 3797.8
散金: 2
紅花: 4
帖子: 688
在線: 108.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 452275
注冊(cè): 2007-11-05
性別: MM
專業(yè): 衛(wèi)生檢驗(yàn)

【答案】應(yīng)助回帖

不用loading buffer能跑出東西來(lái)？

[ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ]

贊一下(2人)

回復(fù)此樓

修煉ｉｎｇ，當(dāng)蟲(chóng)仙……

9樓2014-10-28 21:28:22

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

peterrjp

鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 65 (初中生)
金幣: 24487.5
紅花: 16
帖子: 2608
在線: 67小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 395640
注冊(cè): 2007-06-08
性別: GG
專業(yè): 微生物生態(tài)學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

5樓: Originally posted by 張永婧1991 at 2014-10-26 18:30:34
我做的引物有熒光標(biāo)記，純化會(huì)對(duì)產(chǎn)物的熒光有影響嗎？我看試劑盒的說(shuō)明是可以去除熒光的？我今天又切膠了，結(jié)果還是不好！...

生工、天根的PCR切膠回收或過(guò)柱純化試劑盒都沒(méi)關(guān)系的。當(dāng)年我專門負(fù)責(zé)T-RFLP分析儀

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

7樓2014-10-26 21:17:20

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

普通回帖

peterrjp

鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 65 (初中生)
金幣: 24487.5
紅花: 16
帖子: 2608
在線: 67小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 395640
注冊(cè): 2007-06-08
性別: GG
專業(yè): 微生物生態(tài)學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
張永婧1991(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-10-26 20:46:51

實(shí)在不行可以試試PCR過(guò)柱純化試劑盒，不過(guò)用過(guò)柱純化會(huì)在0~50bp之間有個(gè)很高的雜峰，使用數(shù)據(jù)時(shí)就別用小于50bp的峰了。
PCR產(chǎn)物需要純化后才能做酶切。
我上學(xué)時(shí)還是經(jīng)常做這個(gè)的。

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2014-10-25 20:07:26

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

張永婧1991

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 148.5
帖子: 19
在線: 21小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2510060
注冊(cè): 2013-06-16
專業(yè): 畜牧學(xué)

引用回帖:

2樓: Originally posted by peterrjp at 2014-10-25 20:07:26
實(shí)在不行可以試試PCR過(guò)柱純化試劑盒，不過(guò)用過(guò)柱純化會(huì)在0~50bp之間有個(gè)很高的雜峰，使用數(shù)據(jù)時(shí)就別用小于50bp的峰了。
PCR產(chǎn)物需要純化后才能做酶切。
我上學(xué)時(shí)還是經(jīng)常做這個(gè)的。

純化應(yīng)該比切膠回收好很多吧？現(xiàn)在情況就是切膠收不回來(lái)，不切直接酶切還是沒(méi)條帶。。

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2014-10-26 10:38:43

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

peterrjp

鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 65 (初中生)
金幣: 24487.5
紅花: 16
帖子: 2608
在線: 67小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 395640
注冊(cè): 2007-06-08
性別: GG
專業(yè): 微生物生態(tài)學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

3樓: Originally posted by 張永婧1991 at 2014-10-26 10:38:43
純化應(yīng)該比切膠回收好很多吧？現(xiàn)在情況就是切膠收不回來(lái)，不切直接酶切還是沒(méi)條帶。。...

切膠回收效率低，過(guò)柱純化也還湊合能用，總比你不純化來(lái)得好。不純化，雜質(zhì)會(huì)影響酶切

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2014-10-26 10:48:46

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

張永婧1991

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 148.5
帖子: 19
在線: 21小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2510060
注冊(cè): 2013-06-16
專業(yè): 畜牧學(xué)

引用回帖:

4樓: Originally posted by peterrjp at 2014-10-26 10:48:46
切膠回收效率低，過(guò)柱純化也還湊合能用，總比你不純化來(lái)得好。不純化，雜質(zhì)會(huì)影響酶切...

我做的引物有熒光標(biāo)記，純化會(huì)對(duì)產(chǎn)物的熒光有影響嗎？我看試劑盒的說(shuō)明是可以去除熒光的？我今天又切膠了，結(jié)果還是不好！

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2014-10-26 18:30:34

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

張永婧1991

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 148.5
帖子: 19
在線: 21小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2510060
注冊(cè): 2013-06-16
專業(yè): 畜牧學(xué)

引用回帖:

這個(gè)圖是我今天做的幾個(gè)對(duì)比，第一個(gè)是250bp的marker；第二個(gè)是PCR產(chǎn)物的電泳條帶，正常的目的條帶應(yīng)該是在第三個(gè)位置，因?yàn)榕旅盖械男∑闻軟](méi)了就把時(shí)間縮短了；第三個(gè)是直接酶切PCR產(chǎn)物的，沒(méi)做任何純化步驟；第四個(gè)是把切膠回收后的DNA酶切的；第五個(gè)是50bp的marker。酶切的兩個(gè)均沒(méi)有用loading buffer，是37度酶切后65度失活的，因?yàn)槲矣X(jué)得loading加入后電泳什么都看不到。還有就是，第二個(gè)是正常PCR產(chǎn)物條帶，而第三個(gè)酶切之后這個(gè)條帶沒(méi)有了，是不是說(shuō)明已經(jīng)切出來(lái)了，但是沒(méi)看到亮帶，第四個(gè)基本上看不到什么。

zyj1036-102601.jpg

贊一下

回復(fù)此樓

6樓2014-10-26 18:54:31

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

xavier_yu

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 22.8
帖子: 22
在線: 18.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2199621
注冊(cè): 2012-12-21
專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
張永婧1991(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-10-29 08:56:18

我也做RFLP，切膠回收這塊，你只加樣10ul是不是有點(diǎn)少，我一般PCR做20ul體系，跑膠都是全加的。
你的PCR產(chǎn)物是最亮的那條帶嗎？你說(shuō)是第三個(gè)，不知道指哪個(gè)。
你的PCR結(jié)果好，沒(méi)有其他條帶影響的話，就不用切膠回收了，直接酶切沒(méi)有問(wèn)題的。

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2014-10-28 10:04:39

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

張永婧1991

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 148.5
帖子: 19
在線: 21小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2510060
注冊(cè): 2013-06-16
專業(yè): 畜牧學(xué)

引用回帖:

8樓: Originally posted by xavier_yu at 2014-10-28 10:04:39
我也做RFLP，切膠回收這塊，你只加樣10ul是不是有點(diǎn)少，我一般PCR做20ul體系，跑膠都是全加的。
你的PCR產(chǎn)物是最亮的那條帶嗎？你說(shuō)是第三個(gè)，不知道指哪個(gè)。
你的PCR結(jié)果好，沒(méi)有其他條帶影響的話，就不用切膠回 ...

恩，我已經(jīng)做好了，直接把PCR產(chǎn)物過(guò)柱純化，然后再酶切的~

贊一下

回復(fù)此樓

10樓2014-11-06 10:35:07

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn) 我要訂閱樓主張永婧1991 的主題更新

返回列表

下一頁(yè)

普通表情龍兔虎貓

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 一志愿天大材料與化工（085600）總分338 +5	蔡大美女 2026-03-13	5/250	2026-03-19 10:44 by 是小劉呀～
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +3	墨墨漠 2026-03-18	3/150	2026-03-18 22:35 by bingxueer79
[考研] 085600材料與化工 +5	安全上岸！ 2026-03-16	5/250	2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 286求調(diào)劑 +6	lemonzzn 2026-03-16	9/450	2026-03-18 15:31 by vgtyfty
[考研] 311求調(diào)劑 +6	26研0 2026-03-15	6/300	2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +8	大可digkids 2026-03-16	8/400	2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考博] 26博士申請(qǐng) +3	1042136743 2026-03-17	3/150	2026-03-17 23:30 by 輕松不少隨
[考研] 277調(diào)劑 +5	自由煎餅果子 2026-03-16	6/300	2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 085601求調(diào)劑 +4	Du.11 2026-03-16	4/200	2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 本人考085602 化學(xué)工程專碩 +16	不知道叫什么！ 2026-03-15	18/900	2026-03-17 17:05 by ruiyingmiao
[考研] 275求調(diào)劑 +4	太陽(yáng)花天天開(kāi)心 2026-03-16	4/200	2026-03-17 10:53 by 功夫瘋狂
[考研] 283求調(diào)劑 +3	聽(tīng)風(fēng)就是雨； 2026-03-16	3/150	2026-03-17 07:41 by 熱情沙漠
[考研] 0703一志愿211 285分求調(diào)劑 +5	ly3471z 2026-03-13	5/250	2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 070300化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +6	太想進(jìn)步了0608 2026-03-16	6/300	2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +13	enenenhui 2026-03-13	14/700	2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 255求調(diào)劑 +3	李嘉慧， 2026-03-12	4/200	2026-03-14 16:58 by 有只貍奴
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5	閆旭東 2026-03-14	5/250	2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 297求調(diào)劑 +4	學(xué)海漂泊 2026-03-13	4/200	2026-03-14 11:51 by 熱情沙漠
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +3	d如愿上岸 2026-03-13	3/150	2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 333求調(diào)劑 +3	152697 2026-03-12	4/200	2026-03-13 07:08 by Iveryant

24小時(shí)熱門版塊排行榜

[求助] T-RFLP中回收及酶切相關(guān)問(wèn)題 已有4人參與

» 收錄本帖的淘帖專輯推薦

» 猜你喜歡

» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

【答案】應(yīng)助回帖

【答案】應(yīng)助回帖

【答案】應(yīng)助回帖

【答案】應(yīng)助回帖

【答案】應(yīng)助回帖

[求助] T-RFLP中回收及酶切相關(guān)問(wèn)題已有4人參與

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助: