 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2434 | 回復(fù): 17 | |||
張永婧1991新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
T-RFLP中回收及酶切相關(guān)問(wèn)題 已有4人參與
|
||
|
我做的是腸道微生物多態(tài)性，用T-RFLP技術(shù)，已經(jīng)提取出基因組總DNA，PCR體系為25ul,用通用引物擴(kuò)增出目的片段，1500bp左右，條帶較亮且單一，無(wú)引物二聚體等其他雜物，然后用2%的瓊脂糖凝膠跑電泳做切膠回收，用的是Axygen的凝膠回收試劑盒，每次每孔回收上樣量為10ul，然后將3個(gè)孔的條帶切膠回收，回收后的DNA濃度卻只有10ng/ul左右，用過(guò)天根的試劑盒也是基本上差不多。然后看到論壇上有人說(shuō)單一條帶可以不同切膠回收直接就酶切就可以，于是按照酶切體系進(jìn)行酶切，PCR產(chǎn)物用5ul,酶用1ul。結(jié)果還是沒(méi)有條帶，正常情況如果不酶切的話，那條目的條帶應(yīng)該是存在的吧，但是酶切之后沒(méi)有，說(shuō)明是切開了？可是什么小條帶都看不見(jiàn)。。還有就是如果直接PCR產(chǎn)物酶切的話，這個(gè)產(chǎn)物還要做什么預(yù)處理嗎？求求各位大神，這些都快做了一個(gè)月了，還是沒(méi)有結(jié)果。。�？炜蘖搜�！以前沒(méi)接觸過(guò)分子，望大神指導(dǎo)！圖1是回收后做酶切的條帶，就是這種情況。 圖1.jpg |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 Alphard 02 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有233人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- PCR得到單一條帶后能不能不回收，直接酶切
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 關(guān)于雙酶切的酶的失活問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 基因組酶切問(wèn)題！急！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 怎么預(yù)期酶切產(chǎn)物的大小？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 用T-RFLP的大俠
已經(jīng)有8人回復(fù)
- PBI121載體酶切后回收
已經(jīng)有28人回復(fù)
- 急求酶切，回收及連接詳細(xì)操作步驟
已經(jīng)有10人回復(fù)
- T載體與目的片段大小一致時(shí),怎么酶切回收啊
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 關(guān)于雙酶切后回收的問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- t載體酶切問(wèn)題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 雙酶切后液體回收
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 雙酶切后切膠回收
已經(jīng)有34人回復(fù)
- 提取質(zhì)粒之后又三條帶, 需要切膠回收未開環(huán)DNA再進(jìn)行酶切嗎?
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 關(guān)于SphI酶的酶切問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- T-RFLP檢測(cè)峰值太少
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 雙酶切后目的條帶很淡，回收不到
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 分步酶切 回收不到片段
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 酶切之后跑回收膠總是沒(méi)有條帶是怎么回事呢
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 請(qǐng)教PCR產(chǎn)物酶切后是否可以直接過(guò)柱純化而不膠回收？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物凝膠回收、酶切等問(wèn)題請(qǐng)教
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 純化后酶切產(chǎn)物的保存
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 129bp小片段從pGEM-T上酶切回收的問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】T-RFLP酶切產(chǎn)物存放時(shí)間問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】DNA酶切回收跑膠怎么有小條帶�。縖
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教一下大家的酶切時(shí)間是多久
已經(jīng)有8人回復(fù)
j2
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 56 (初中生)
- 金幣: 3797.8
- 散金: 2
- 紅花: 4
- 帖子: 688
- 在線: 108.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 452275
- 注冊(cè): 2007-11-05
- 性別: MM
- 專業(yè): 衛(wèi)生檢驗(yàn)
9樓2014-10-28 21:28:22
peterrjp
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 65 (初中生)
- 金幣: 24487.5
- 紅花: 16
- 帖子: 2608
- 在線: 67小時(shí)
- 蟲號(hào): 395640
- 注冊(cè): 2007-06-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生態(tài)學(xué)
7樓2014-10-26 21:17:20
peterrjp
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 65 (初中生)
- 金幣: 24487.5
- 紅花: 16
- 帖子: 2608
- 在線: 67小時(shí)
- 蟲號(hào): 395640
- 注冊(cè): 2007-06-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生態(tài)學(xué)
2樓2014-10-25 20:07:26
張永婧1991
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 148.5
- 帖子: 19
- 在線: 21小時(shí)
- 蟲號(hào): 2510060
- 注冊(cè): 2013-06-16
- 專業(yè): 畜牧學(xué)
3樓2014-10-26 10:38:43
peterrjp
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 65 (初中生)
- 金幣: 24487.5
- 紅花: 16
- 帖子: 2608
- 在線: 67小時(shí)
- 蟲號(hào): 395640
- 注冊(cè): 2007-06-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生態(tài)學(xué)
4樓2014-10-26 10:48:46
張永婧1991
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 148.5
- 帖子: 19
- 在線: 21小時(shí)
- 蟲號(hào): 2510060
- 注冊(cè): 2013-06-16
- 專業(yè): 畜牧學(xué)
5樓2014-10-26 18:30:34
張永婧1991
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 148.5
- 帖子: 19
- 在線: 21小時(shí)
- 蟲號(hào): 2510060
- 注冊(cè): 2013-06-16
- 專業(yè): 畜牧學(xué)
|
這個(gè)圖是我今天做的幾個(gè)對(duì)比，第一個(gè)是250bp的marker；第二個(gè)是PCR產(chǎn)物的電泳條帶，正常的目的條帶應(yīng)該是在第三個(gè)位置，因?yàn)榕旅盖械男∑闻軟](méi)了就把時(shí)間縮短了；第三個(gè)是直接酶切PCR產(chǎn)物的，沒(méi)做任何純化步驟；第四個(gè)是把切膠回收后的DNA酶切的；第五個(gè)是50bp的marker。酶切的兩個(gè)均沒(méi)有用loading buffer，是37度酶切后65度失活的，因?yàn)槲矣X(jué)得loading加入后電泳什么都看不到。還有就是，第二個(gè)是正常PCR產(chǎn)物條帶，而第三個(gè)酶切之后這個(gè)條帶沒(méi)有了，是不是說(shuō)明已經(jīng)切出來(lái)了，但是沒(méi)看到亮帶，第四個(gè)基本上看不到什么。 zyj1036-102601.jpg |
6樓2014-10-26 18:54:31
xavier_yu
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 22.8
- 帖子: 22
- 在線: 18.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2199621
- 注冊(cè): 2012-12-21
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
8樓2014-10-28 10:04:39
張永婧1991
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 148.5
- 帖子: 19
- 在線: 21小時(shí)
- 蟲號(hào): 2510060
- 注冊(cè): 2013-06-16
- 專業(yè): 畜牧學(xué)
10樓2014-11-06 10:35:07
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 張永婧1991 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿福大288有機(jī)化學(xué)，求調(diào)劑 +3 | 小木蟲200408204 2026-03-18 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +6 | 于海海海海 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿武漢理工材料工程專碩調(diào)劑 +3 | Doleres 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0817調(diào)劑 +3 | 沒(méi)有答案_ 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +5 | z1z2z3879 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以） +3 | xbxudjdn 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +3 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +6 | lemonzzn 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專利，省、國(guó)級(jí)證書40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料專碩306英一數(shù)二 +10 | z1z2z3879 2026-03-16 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +3 | 志存高遠(yuǎn)意在機(jī)?/a> 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 被我言中：新模板不強(qiáng)調(diào)格式了，假專家開始管格式了 +4 | beefly 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Zz版 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩274一志愿211求調(diào)劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | Yy7400 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 東華理工大學(xué)化材專業(yè)26屆碩士博士申請(qǐng) +6 | zlingli 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 招收0805（材料）調(diào)劑 +3 | 18595523086 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 309分請(qǐng)求調(diào)劑 +7 | dtdxzxx 2026-03-12 | 8/400 |
|