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小雒饕餮新蟲 (初入文壇)
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[求助]
質(zhì)粒載體構(gòu)建不成功 已有7人參與
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| 質(zhì)粒重組轉(zhuǎn)入DH5α，多次不長(zhǎng)斑 ，偶爾有斑后，PCR有帶 ，酶切無帶，怎么回事？求各位高手解答下，菜鳥我做了半年了好惆悵、、、、 |
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2樓2014-10-31 19:37:30
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4樓2014-11-02 14:34:47
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7樓2014-11-20 09:52:38
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8樓2014-11-20 10:59:59
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小雒饕餮(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-20 17:09:00
小雒饕餮(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-20 17:09:00
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連接前的膠回收的載體與目的基因濃度多大？做連接前一定要保證載體的量（至少20~50ng），目的基因過量；而且做好對(duì)照，載體+水(代替目的基因)+T4 ligase+buffer，同樣條件連接然后轉(zhuǎn)化，另外載體直接轉(zhuǎn)化，如果載體兩端產(chǎn)生粘性末端則載體無法自連，載體處理好了才能與有相同末端的目的基因相連，不是長(zhǎng)出斑都OK，活著PCR能P出來就OK的，一定做好陰性對(duì)照，就是我剛才說的載體自連的對(duì)照 |
9樓2014-11-20 13:51:39
10樓2014-11-21 09:21:13
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