 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1242 | 回復(fù): 2 | ||
[求助]
新手求問Western Blot中裂解細胞、抗體選擇、轉(zhuǎn)膜、磷酸化蛋白檢測等問題 已有2人參與
|
|
要畢業(yè)啦，可是還有一部分實驗需要用Western Blot，才剛開始學(xué)，那個急��！上手遇到各種問題。 其一，在裂解細胞收集蛋白時，我用的是碧云天的RIPA裂解液，先加了PMSF和蛋白酶抑制劑分裝與-20保存的，臨用前解凍加入磷酸酶抑制劑，但我看網(wǎng)上寫的PMSF是需要臨用現(xiàn)加的，就不知道我的方法會不會有問題。想問問是不是應(yīng)該先將蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑加入裂解液中分裝保存，臨用時再加PMSF呢？ 其二，我用的是碧云天的抗體，不知道該公司的抗體如何啊？我是要檢測磷酸化蛋白如P38、ERK、JNK等，聽說磷酸化蛋白不是很好做，這幾個呢？如果國產(chǎn)抗體不好，哪些公司的抗體會好一些？磷酸化蛋白檢測需要注意些什么問題？ 其三，就是我實驗中遇到的問題了……我同時做了兩塊膠，在轉(zhuǎn)膜時同一個三明治里面放的，即兩張海綿/兩張濾紙/膠/膜/兩張濾紙/一張海綿/兩張濾紙/膠/膜/兩張濾紙/兩張海綿，300mA, 2h，很神奇的是靠近負(fù)極的那張膠全轉(zhuǎn)到膜上了，靠近正極的卻只轉(zhuǎn)了一部分，這是什么原因啊？ 此外，我還遇到一個問題，用ECL顯色5min后放入bio-rad凝膠成像系統(tǒng)中顯影，發(fā)現(xiàn)顯色過久的話那個試劑基本上就嵌入膜里了，根本無法用一抗二抗去除液洗掉，這個時候該怎么辦呢？如果strip液洗太久會不會把蛋白也給洗下來了？ 好糾結(jié)啊，沒有多少時間可以慢慢做實驗了，還請各位高手指教啊！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有171人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 請教有關(guān)Westen Blot抗體有關(guān)的問題
已經(jīng)有16人回復(fù)
- Western Blot實驗的蛋白條帶都連在一起
已經(jīng)有37人回復(fù)
- WB結(jié)果不理想，呼喚幫助
已經(jīng)有20人回復(fù)
- Western Blot 磷酸化蛋白測定問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
上張圖吧，磚模反了，估計是黑膠白膜沒放對，或者電極放錯了，多問實驗室?guī)熜謳熃惆�，我都是臨時加PMSF，你是AP,,還是HRP顯色，看到目的條帶，水沖就可以終止顯色啊，多和實驗室?guī)熜謳熃憬涣靼? 
2樓2014-11-05 19:03:10
日子妞兒
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 43.8
- 帖子: 20
- 在線: 14.5小時
- 蟲號: 3532606
- 注冊: 2014-11-12
- 性別: MM
- 專業(yè): 獸醫(yī)免疫學(xué)
3樓2014-11-14 14:07:19
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 七星草 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料學(xué)學(xué)碩080502 337求調(diào)劑-一志愿華中科技大學(xué) +3 | 順順順mr 2026-03-18 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | Mqqqqqq 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +6 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +5 | 睿08 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +10 | 冷笙123 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研]
 271材料工程求調(diào)劑
+8
|
.6lL 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +7 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +7 | ^O^乜 2026-03-19 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 260求調(diào)劑 +3 | 朱芷琳 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑 +11 | Ymlll 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +7 | 困于星晨 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 324分 +10 | llllkkkhh 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項核心論文五項專利，省、國級證書40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +5 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料專碩326求調(diào)劑 +6 | 墨煜姒莘 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料工程（085601）專碩有科研經(jīng)歷三項國獎兩個實用型專利一項省級立項 +6 | 大火山小火山 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +5 | 素年祭語 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 本科南京大學(xué)一志愿川大藥學(xué)327 +3 | 麥田耕者 2026-03-14 | 3/150 |
|