 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1243 | 回復(fù): 2 | ||
[求助]
新手求問(wèn)Western Blot中裂解細(xì)胞、抗體選擇、轉(zhuǎn)膜、磷酸化蛋白檢測(cè)等問(wèn)題 已有2人參與
|
|
要畢業(yè)啦，可是還有一部分實(shí)驗(yàn)需要用Western Blot，才剛開(kāi)始學(xué)，那個(gè)急��！上手遇到各種問(wèn)題。 其一，在裂解細(xì)胞收集蛋白時(shí)，我用的是碧云天的RIPA裂解液，先加了PMSF和蛋白酶抑制劑分裝與-20保存的，臨用前解凍加入磷酸酶抑制劑，但我看網(wǎng)上寫(xiě)的PMSF是需要臨用現(xiàn)加的，就不知道我的方法會(huì)不會(huì)有問(wèn)題。想問(wèn)問(wèn)是不是應(yīng)該先將蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑加入裂解液中分裝保存，臨用時(shí)再加PMSF呢？ 其二，我用的是碧云天的抗體，不知道該公司的抗體如何啊？我是要檢測(cè)磷酸化蛋白如P38、ERK、JNK等，聽(tīng)說(shuō)磷酸化蛋白不是很好做，這幾個(gè)呢？如果國(guó)產(chǎn)抗體不好，哪些公司的抗體會(huì)好一些？磷酸化蛋白檢測(cè)需要注意些什么問(wèn)題？ 其三，就是我實(shí)驗(yàn)中遇到的問(wèn)題了……我同時(shí)做了兩塊膠，在轉(zhuǎn)膜時(shí)同一個(gè)三明治里面放的，即兩張海綿/兩張濾紙/膠/膜/兩張濾紙/一張海綿/兩張濾紙/膠/膜/兩張濾紙/兩張海綿，300mA, 2h，很神奇的是靠近負(fù)極的那張膠全轉(zhuǎn)到膜上了，靠近正極的卻只轉(zhuǎn)了一部分，這是什么原因啊？ 此外，我還遇到一個(gè)問(wèn)題，用ECL顯色5min后放入bio-rad凝膠成像系統(tǒng)中顯影，發(fā)現(xiàn)顯色過(guò)久的話那個(gè)試劑基本上就嵌入膜里了，根本無(wú)法用一抗二抗去除液洗掉，這個(gè)時(shí)候該怎么辦呢？如果strip液洗太久會(huì)不會(huì)把蛋白也給洗下來(lái)了？ 好糾結(jié)啊，沒(méi)有多少時(shí)間可以慢慢做實(shí)驗(yàn)了，還請(qǐng)各位高手指教啊！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有202人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 請(qǐng)教有關(guān)Westen Blot抗體有關(guān)的問(wèn)題
已經(jīng)有16人回復(fù)
- Western Blot實(shí)驗(yàn)的蛋白條帶都連在一起
已經(jīng)有37人回復(fù)
- WB結(jié)果不理想，呼喚幫助
已經(jīng)有20人回復(fù)
- Western Blot 磷酸化蛋白測(cè)定問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
上張圖吧，磚模反了，估計(jì)是黑膠白膜沒(méi)放對(duì)，或者電極放錯(cuò)了，多問(wèn)實(shí)驗(yàn)室?guī)熜謳熃惆�，我都是臨時(shí)加PMSF，你是AP,,還是HRP顯色，看到目的條帶，水沖就可以終止顯色啊，多和實(shí)驗(yàn)室?guī)熜謳熃憬涣靼? 
2樓2014-11-05 19:03:10
日子妞兒
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 43.8
- 帖子: 20
- 在線: 14.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3532606
- 注冊(cè): 2014-11-12
- 性別: MM
- 專業(yè): 獸醫(yī)免疫學(xué)
3樓2014-11-14 14:07:19
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 七星草 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境總分308求調(diào)劑 +6 | 墨墨漠 2026-03-20 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +11 | 呼呼呼。。。。 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +3 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +6 | 梁茜雯 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +5 | 睿08 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
[考研] 化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | ydfyh 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 華東師范大學(xué)-071000生物學(xué)-293分-求調(diào)劑 +3 | 研究生何瑤明 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +9 | 想上學(xué)吖吖 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩297已過(guò)四六級(jí)求調(diào)劑推薦 +11 | adaie 2026-03-19 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調(diào)劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0817 化學(xué)工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章 +22 | rare12345 2026-03-18 | 22/1100 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 319求調(diào)劑 +3 | 小力氣珂珂 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 18889395102 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 本科鄭州大學(xué)物理學(xué)院，一志愿華科070200學(xué)碩，346求調(diào)劑 +4 | 我不是一根蔥 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070303 總分349求調(diào)劑 +3 | LJY9966 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 080500，材料學(xué)碩302分求調(diào)劑學(xué)校 +4 | 初識(shí)可樂(lè) 2026-03-14 | 5/250 |
|