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霍燁zz銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
RNA提取及電泳 已有1人參與
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提取的腸道粘膜RNA，測(cè)了OD值，結(jié)果如下： 還想檢測(cè)下完整性，所以跑了電泳 用的是1%瓊脂糖+2ul golden view 5ul RNA + 5ul 2X RNA loading dye (65℃，變性10min） 然后110V，跑了30min，結(jié)果卻是這么個(gè)樣子：（上樣量8ul） 不知道是出了什么問題呢？ 另，因?yàn)槭且鲛D(zhuǎn)錄組測(cè)試，所以公司對(duì)樣品要求比較嚴(yán)格，說是跑膠必須是28S和18S兩條帶的比例接近2 但我有個(gè)疑問，就是轉(zhuǎn)錄組測(cè)序主要是針對(duì)mRNA，而mRNA在total RNA中只占1~5%，幾乎都不能在膠上看到，那么電泳膠沒跑好就一定意味著做不了測(cè)序嗎？ 像我這種情況送樣給公司，能有多大把握成功測(cè)序？ 謝謝大家了��！ |
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霍燁zz2樓2014-11-20 09:27:14
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| 做膠的時(shí)候是有技巧的，比如你要配1%的膠，原則上你要0.2g瓊脂糖加20ml TAE,但為了防止蒸發(fā)，你要加25ml的TAE，還有就是微波爐加熱過程中間，可以拿出來搖勻一下，再放入微波爐，煮沸后，立即在水龍頭下沖一下，迅速降溫，但切忌不能在冰上冷卻，不然會(huì)爆的，如果你的手可以承受這個(gè)溫度，就立馬倒膠，注意這兩點(diǎn)就可以了，重點(diǎn)就是快 |
8樓2014-11-20 11:05:23
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9樓2014-11-21 08:32:46
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