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霍燁zz銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
RNA提取及電泳 已有1人參與
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提取的腸道粘膜RNA，測(cè)了OD值，結(jié)果如下： 還想檢測(cè)下完整性，所以跑了電泳 用的是1%瓊脂糖+2ul golden view 5ul RNA + 5ul 2X RNA loading dye (65℃，變性10min） 然后110V，跑了30min，結(jié)果卻是這么個(gè)樣子：（上樣量8ul） 不知道是出了什么問(wèn)題呢？ 另，因?yàn)槭且鲛D(zhuǎn)錄組測(cè)試，所以公司對(duì)樣品要求比較嚴(yán)格，說(shuō)是跑膠必須是28S和18S兩條帶的比例接近2 但我有個(gè)疑問(wèn)，就是轉(zhuǎn)錄組測(cè)序主要是針對(duì)mRNA，而mRNA在total RNA中只占1~5%，幾乎都不能在膠上看到，那么電泳膠沒(méi)跑好就一定意味著做不了測(cè)序嗎？ 像我這種情況送樣給公司，能有多大把握成功測(cè)序？ 謝謝大家了��！ |
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9樓2014-11-21 08:32:46
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-21 23:22:06
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-21 23:22:06
| 通過(guò)28S和18S兩條帶的比例接近2來(lái)判斷RNA有無(wú)降解，是方法之一。送樣到公司后，他們會(huì)對(duì)RNA做質(zhì)檢的，我們送的公司，出具了安捷倫2100質(zhì)檢報(bào)告給我們，以RIN值來(lái)判斷。跑瓊脂糖電泳，影響因素比較多，有可能是電泳過(guò)程中引起的降解。還有你送樣的是RNA，萬(wàn)一運(yùn)輸路上降解算誰(shuí)的？不如直接讓公司抽提更保險(xiǎn)。 |
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霍燁zz2樓2014-11-20 09:27:14
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4樓2014-11-20 09:50:48
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